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大豆胚尖再生体系的建立及基因IFS2与FAD3的遗传转化

中文摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-13页
第一章 绪论第13-24页
   ·大豆异黄酮的概述第13-15页
     ·大豆异黄酮的结构第13页
     ·大豆异黄酮的物化性质第13-14页
     ·大豆异黄酮的生理及保健功能第14-15页
   ·不饱和脂肪酸的概述第15-17页
     ·不饱和脂肪酸的重要性第15-16页
     ·不饱和脂肪酸的类型第16页
     ·不饱和脂肪酸的生理功能第16页
     ·膳食中的不饱和脂肪酸对健康的影响第16-17页
     ·不饱和脂肪酸的医学作用第17页
   ·植株转基因技术的概述第17-19页
     ·农杆菌介导的遗传转化第17-18页
     ·花粉管通道法第18-19页
     ·基因枪法第19页
   ·应用于大豆转基因的受体系统第19-21页
     ·丛生芽器官发生途径第19-21页
     ·原生质体系统第21页
     ·体细胞胚胎途径第21页
   ·影响农杆菌介导遗传转化的主要因素第21-24页
     ·受体类型及基因型第22页
     ·农杆菌菌株第22页
     ·筛选策略第22-24页
第二章 IFS2 和 FAD3 基因植物表达载体构建第24-39页
   ·材料第24-25页
     ·植物材料第24页
     ·质粒和菌种第24页
     ·酶和相关试剂第24页
     ·主要仪器第24-25页
   ·方法第25-35页
     ·RNAiso Reagent 提取大豆叶片组织总 RNA第25页
     ·RNA 反转录成 cDNA第25-26页
     ·IFS2 和 FAD3 基因克隆相关引物第26-27页
     ·IFS2 和 FAD3 基因的 PCR 克隆与目的片段回收第27-28页
     ·目的片段与 pMD18-T 载体连接第28-29页
     ·大肠杆菌 DH5α 感受态细胞的制备第29页
     ·连接产物热激法转化大肠杆菌第29-30页
     ·提取质粒第30-31页
     ·酶切鉴定与测序第31页
     ·目的片段与植物表达载体连接(Gateway 技术)第31-33页
     ·提取重组质粒 DNA第33-34页
     ·农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备第34页
     ·重组表达载体冻融法转化农杆菌第34-35页
     ·PCR 鉴定转入农杆菌后的阳性克隆第35页
   ·结果与分析第35-38页
     ·IFS2 和 FAD3 基因 PCR 扩增产物分析第35-36页
     ·目的基因与 pMD18-T 载体连接双酶切鉴定与测序第36页
     ·NheI 酶切线性化第36-37页
     ·重组质粒转化根癌农杆菌的 PCR 鉴定第37-38页
   ·本章小结第38-39页
第三章 大豆胚尖再生体系的建立第39-53页
   ·材料第39-42页
     ·受体材料第39页
     ·激素和相关生化试剂第39-40页
     ·主要仪器设备第40页
     ·基础培养基第40-41页
     ·培养过程相关培养基第41-42页
   ·方法第42-45页
     ·十个大豆品种间胚尖丛生芽出芽率比较第42页
     ·十个大豆品种 GUS 活性比较第42-43页
     ·种子消毒第43-44页
     ·浸泡时间第44页
     ·丛生芽的发生位置第44页
     ·6-BA 和 IBA 对大豆胚尖丛生芽再生效果的影响第44-45页
     ·无机盐、糖类及 IBA 对生根的影响第45页
   ·结果与分析第45-51页
     ·十个大豆品种的胚尖丛生芽出芽率比较第45-46页
     ·十个大豆品种 GUS 活性比较第46-47页
     ·种子消毒第47页
     ·浸泡时间第47-48页
     ·丛生芽的发生位置第48-49页
     ·6-BA 和 IBA 对大豆胚尖丛生芽再生率的影响第49-50页
     ·无机盐、糖类及 IBA 对生根的影响第50-51页
   ·本章小结第51-53页
第四章 农杆菌介导的胚尖遗传转化体系的建立第53-65页
   ·材料第53-54页
     ·受体材料第53页
     ·载体和菌株第53页
     ·转化过程相关培养基第53-54页
   ·方法第54-56页
     ·不同侵染方式 GUS 活性检测第54页
     ·不同浓度 Silwet L-77 的 GUS 瞬时染色效果第54-55页
     ·脯氨酸和硝酸银对褐化的影响第55页
     ·农杆菌菌液 OD 值对转化系统效率的影响第55页
     ·抗生素浓度对植株再生的影响第55-56页
     ·筛选策略第56页
   ·结果与分析第56-63页
     ·不同侵染方式 GUS 活性检测第56-57页
     ·不同浓度 Silwet L-77 的 GUS 瞬时染色效果第57-58页
     ·脯氨酸和硝酸银对褐化的影响第58-59页
     ·不同农杆菌菌液 OD 值的 GUS 染色效果第59-60页
     ·抗生素浓度对植株再生的影响第60-61页
     ·筛选策略第61-63页
     ·吉林 35 以胚尖为外植体的遗传转化流程第63页
   ·本章小结第63-65页
第五章 农杆菌介导的胚尖遗传转化体系的建立第65-72页
   ·材料与方法第65-68页
     ·T0代植株的 PCR 检测第65-67页
     ·T0代植株 bar 基因试纸条检测第67页
     ·T1代植株的筛选和检测第67页
     ·合丰 35、东农 42 和吉林 35 三个大豆品种间 T0代转化率的比较第67-68页
   ·结果与分析第68-71页
     ·T0代植株 PCR 检测目的基因第68-69页
     ·T0代植株 bar 基因试纸条检测第69页
     ·T1代植株 PCR 检测目的基因第69-70页
     ·合丰 35、东农 42 和吉林 35 三个品种间 T0代转化率的比较第70-71页
   ·本章小结第71-72页
结论第72-73页
参考文献第73-81页
作者简介第81-82页
致谢第82页

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