GS115-pPIC9k-ChiA 4.0工程菌产HaSNPV几丁质酶的条件优化、产物分离及毒理学研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| ·几丁质 | 第9页 |
| ·几丁质酶及研究进展 | 第9-12页 |
| ·几丁质酶 | 第9-10页 |
| ·几丁质酶研究进展 | 第10-11页 |
| ·几丁质酶的特点 | 第11-12页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第12-14页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第14-16页 |
| ·杆状病毒几丁质酶 | 第16-19页 |
| ·杆状病毒 | 第16-18页 |
| ·棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒(HaSNPV) | 第18-19页 |
| ·本研究的目的、意义、内容和技术路线 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·本研究的内容 | 第20页 |
| ·本研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 多拷贝菌株筛选及发酵条件优化 | 第21-33页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·Mut~+转化子的筛选 | 第22-23页 |
| ·多拷贝重组菌筛选 | 第23页 |
| ·甲醇诱导浓度对菌体产酶的影响 | 第23页 |
| ·甲醇添加前培养时间对菌体产酶的影响 | 第23-24页 |
| ·甲醇诱导总时间对菌体产酶的影响 | 第24页 |
| ·摇床培养转速对菌体产酶的影响 | 第24页 |
| ·培养温度对菌体产酶的影响 | 第24页 |
| ·培养液pH值对菌体产酶的影响 | 第24页 |
| ·培养基配方优化 | 第24页 |
| ·几丁质酶酶含量测定 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-31页 |
| ·多拷贝重组菌株的筛选 | 第25-26页 |
| ·甲醇诱导浓度对菌体产酶的影响 | 第26页 |
| ·甲醇添加前菌体培养时间对产酶的影响 | 第26-27页 |
| ·甲醇诱导总时间对菌体产酶的影响 | 第27-28页 |
| ·摇床培养转速对菌体产酶的影响 | 第28页 |
| ·培养温度对菌体产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·培养液pH值对菌体产酶的影响 | 第29页 |
| ·培养基配方优化及验证 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 HaSNPV几丁质酶分离纯化 | 第33-46页 |
| ·仪器及材料 | 第33-35页 |
| ·菌种 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·发酵液制备 | 第35页 |
| ·发酵上清液制备 | 第35页 |
| ·分步盐析 | 第35-36页 |
| ·透析 | 第36页 |
| ·HaSNPV几丁质酶的柱层析法分离 | 第36-37页 |
| ·平衡缓冲液pH值对几丁质酶分离的影响 | 第37页 |
| ·上样量对几丁质酶分离的影响 | 第37页 |
| ·离子强度对几丁质酶分离的影响 | 第37-38页 |
| ·流速对几丁质酶分离的影响 | 第38页 |
| ·分离效果评析 | 第38页 |
| ·总蛋白浓度及几丁质酶纯度测定 | 第38页 |
| ·结果及分析 | 第38-44页 |
| ·盐析饱和度与蛋白含量 | 第38-39页 |
| ·平衡缓冲液pH值对几丁质酶分离的影响 | 第39-40页 |
| ·上样量对几丁质酶分离的影响 | 第40页 |
| ·离子强度对几丁质酶分离的影响 | 第40-42页 |
| ·流速对几丁质酶分离的影响 | 第42-44页 |
| ·分离效果评析 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 HaSNPV几丁质酶的毒理学性质研究 | 第46-59页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·生测法 | 第47-49页 |
| ·抑菌试验 | 第49页 |
| ·结果及分析 | 第49-58页 |
| ·生测法 | 第49-57页 |
| ·几丁质酶对病原真菌的作用 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 附录:真核表达常用培养基及试剂配方 | 第61-64页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
