| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 1 引言 | 第12-17页 |
| ·病原 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·易感动物 | 第13页 |
| ·流行季节性 | 第13页 |
| ·发病机理 | 第13页 |
| ·PPRV 的结构 | 第13-14页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第14-15页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·病理变化 | 第14-15页 |
| ·预防与控制 | 第15页 |
| ·基因免疫的研究进展 | 第15-17页 |
| ·DNA 疫苗的优点 | 第15页 |
| ·DNA 疫苗的免疫机制 | 第15-16页 |
| ·DNA 疫苗的优化策略 | 第16-17页 |
| 实验研究 | 第17-43页 |
| 实验一 小反刍兽疫病毒H、F 蛋白抗原位点的原核表达 | 第17-27页 |
| 1 材料与方法 | 第17-22页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·质粒、菌种和病料 | 第17页 |
| ·试剂与工具酶 | 第17页 |
| ·PPRV H、F 基因抗原位点的分析 | 第17-18页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-22页 |
| ·总RNA 的提取和RT-PCR | 第19页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第19页 |
| ·一步法RT-PCR | 第19页 |
| ·重组质粒pZLW016(PET-28b-H66-249) 、pZLW017(PET-28b-H281-550)、pZLW013(PET-28b-F35-111) 、pZLW014(PET-28b-F143-485) 和pZLW015(PET-28b-F323-485)的构建与鉴定 | 第19-21页 |
| ·重组质粒pZLW016、pZLW017 、pZLW013 、pZLW014 和pZLW015 的构建 | 第19-20页 |
| ·重组质粒pZLW016、pZLW017 、pZLW013 、pZLW014 和pZLW015 的鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第21页 |
| ·SDS—PAGE 检测 | 第21页 |
| ·样品制备 | 第21页 |
| ·凝胶灌制及电泳 | 第21页 |
| ·重组蛋白的纯化和Western blot 检测 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第21页 |
| ·Western blot 检测 | 第21-22页 |
| 2 结果 | 第22-26页 |
| ·总RNA 的提取 | 第22页 |
| ·RT-PCR 扩增H66-249、H281-550、F35-111、F143-485 和F323-485 编码序列 | 第22页 |
| ·重组质粒pZLW016、pZLW017 、pZLW013 、pZLW014 和pZLW015 的鉴定与序列分析 | 第22页 |
| ·重组质粒pZLW016、pZLW017 、pZLW013 、pZLW014 和pZLW015 表达产物的SDS-PAGE 和Western blotting 检测 | 第22-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 实验二 小反刍兽疫基因免疫真核表达载体的构建 | 第27-33页 |
| 1 材料与方法 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·质粒、菌种和病料 | 第27页 |
| ·主要试剂与工具酶 | 第27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·总RNA 的提取和RT-PCR | 第27-28页 |
| ·pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1 -F 和pIRES1 –NF 重组质粒的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pIRES1-N 的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒pIRES1-H 的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒pIRES1 –F 的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒pIRES1 –NF 的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1 -F 和pIRES1–NF 重组质粒在Vero 细胞中的转染与鉴定 | 第28-29页 |
| ·pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1 -F 和pIRES1 –NF 重组质粒在Vero 细胞中的转染 | 第28-29页 |
| ·pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1 -F 和pIRES1–NF 重组质粒在Vero 细胞中表达的鉴定 | 第29页 |
| ·免疫荧光检测 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-31页 |
| ·总RNA 的提取 | 第29页 |
| ·RT-PCR 扩增N、H、F 编码序列 | 第29页 |
| ·重组质粒pIRES1neo-N、pIRES1neo-H、pIRES1neo-F 和pIRES1neo –NF的酶切鉴定与序列分析 | 第29页 |
| ·pIRES1neo-N、pIRES1neo-H、pIRES1neo-F 和pIRES1neo–NF 在Vero细胞中的表达的鉴定 | 第29-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 实验三: 小反刍兽疫基因免疫本体动物实验 | 第33-43页 |
| 1 材料和方法 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·质粒、蛋白 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·质粒DNA 的大量制备 | 第33-34页 |
| ·免疫方法 | 第34页 |
| ·抗体检测 | 第34-36页 |
| ·山羊血清的制备 | 第34页 |
| ·ELISA 抗体检测 | 第34-35页 |
| ·抗原效价的确定 | 第34-35页 |
| ·抗体检测 | 第35页 |
| ·Western blot 抗体检测 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE | 第35页 |
| ·样品制备 | 第35页 |
| ·凝胶灌制及电泳 | 第35页 |
| ·电转印 | 第35-36页 |
| ·Werstern blot 检测 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-42页 |
| ·抗体检测结果 | 第36-41页 |
| ·ELISA 抗体检测结果 | 第36-41页 |
| ·Western blot 抗体检测结果 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43页 |
| 本论文创新性 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
