| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第一章 上皮型钙黏附蛋白与肿瘤转移 | 第14-23页 |
| 一、E-cadh分子研究现状 | 第14-21页 |
| 1、E-cadh结构与功能 | 第14-15页 |
| 2、E-cadh失活的机制 | 第15-17页 |
| 3、E-cadh参与调控的细胞信号转导途径 | 第17-18页 |
| 4、E-cadh分子与EMT(Epithelial-Mesenchymal Transition) | 第18-19页 |
| 5、E-cadh与离巢凋亡(anoikis) | 第19-21页 |
| 二、E-cadh在肿瘤抗离巢凋亡中作用研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章:E-cadh稳定表达细胞株的建立及其增殖、黏附特性的检测 | 第23-46页 |
| 摘要 | 第23页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 实验材料 | 第24-28页 |
| 一、细胞系 | 第24页 |
| 二、菌株 | 第24页 |
| 三、质粒 | 第24页 |
| 四、抗体 | 第24页 |
| 五、培养基、主要试剂及耗材 | 第24-25页 |
| 六、主要储备液及工作液的配制 | 第25-27页 |
| 七、主要仪器 | 第27-28页 |
| 实验方法 | 第28-36页 |
| 一、细胞培养 | 第28页 |
| 二、质粒转化、扩增 | 第28页 |
| 三、质粒小量提取 | 第28-29页 |
| 四、酶切鉴定E-cadh-pcDNA3质粒 | 第29页 |
| 五、琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物 | 第29页 |
| 六、质粒大量提取 | 第29-30页 |
| 七、细胞转染 | 第30页 |
| 八、转染后细胞的克隆培养 | 第30-31页 |
| 九、细胞免疫组织化学染色 | 第31页 |
| 十、细胞总蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 十一、BCA法检测蛋白浓度 | 第32页 |
| 十二、Western Blotting | 第32-34页 |
| 十三、免疫沉淀(IP) | 第34页 |
| 十四、MTT法检测细胞增殖 | 第34-35页 |
| 十五、黏附实验 | 第35页 |
| 十六 统计分析方法 | 第35-36页 |
| 实验结果 | 第36-43页 |
| 一、酶切、测序鉴定E-cadh pcDNA3.0质粒 | 第36页 |
| 二、稳定表达E-cadh的转染细胞株的建立 | 第36-37页 |
| 三、E-cadh蛋白表达对肿瘤细胞形态的影响 | 第37页 |
| 四、E-cadherin蛋白表达对肿瘤细胞Cytokeratin、Vimentin表达的影响 | 第37-38页 |
| 五、MDA-MB-231人乳腺癌细胞中E-cadh蛋白的表达调控 | 第38-40页 |
| 六、E-cadh蛋白表达对肿瘤细胞黏附能力的影响 | 第40-41页 |
| 七、E-cadh表达对细胞增殖相关分子表达水平的影响 | 第41-42页 |
| 八、E-cadh表达后与细胞内β-catenin的相互作用 | 第42页 |
| 九、E-cadh蛋白表达对肿瘤细胞增殖能力的影响 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章:E-cadherin表达对肿瘤细胞离巢凋亡的影响及其机理研究 | 第46-59页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 实验材料 | 第47-48页 |
| 一、细胞系 | 第47页 |
| 二、培养基、主要试剂及耗材 | 第47页 |
| 三、抗体 | 第47-48页 |
| 四、主要储备液及工作液的配制 | 第48页 |
| 五、主要仪器 | 第48页 |
| 实验方法 | 第48-49页 |
| 一、细胞培养 | 第48页 |
| 二、细胞总蛋白的提取 | 第48页 |
| 三、BCA法检测蛋白浓度 | 第48页 |
| 四、Western Blotting | 第48页 |
| 五、流式检测细胞周期及细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 六、统计分析方法 | 第49页 |
| 实验结果 | 第49-55页 |
| 一、常规培养时各肿瘤细胞增殖无差别 | 第49-50页 |
| 二、离巢后各肿瘤细胞增殖受到抑制 | 第50页 |
| 三、各种肿瘤细胞离巢时凋亡增加 | 第50-51页 |
| 四、调节E-cadh功能状态及表达对细胞凋亡的影响 | 第51-55页 |
| 讨论 | 第55-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 附录一 | 第67-72页 |
| 一、E-cadh基因CDS序列 | 第67-68页 |
| 二、受赠载体测序结果 | 第68-69页 |
| 三、Pubmed比对结果 | 第69-72页 |
| 附录2:已发表文章 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76-78页 |
