摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-11页 |
第一章 绪论 | 第11-18页 |
·CYP19 基因和 P450arom 的结构 | 第11-14页 |
·细胞色素P450 家族与CYP19 基因 | 第11-12页 |
·细胞色素P450 芳香化酶结构以及作用机理 | 第12-14页 |
·芳香化酶的分布 | 第14-15页 |
·芳香化酶在哺乳动物体内的表达分布 | 第14页 |
·鱼类组织中芳香化酶的表达 | 第14-15页 |
·芳香化酶的表达与调控 | 第15-17页 |
·雌激素对芳香化酶的表达调控 | 第15-16页 |
·雄性激素对芳香化酶的调节 | 第16页 |
·依赖于CREB(cAMP 反应元件结合蛋白)对芳香化酶的调节 | 第16页 |
·核受体对芳香化酶的调节作用 | 第16-17页 |
·本课题研究目的和内容 | 第17-18页 |
第二章 草鱼脑芳香化酶的 cDNA 克隆 | 第18-36页 |
·实验材料 | 第18-20页 |
·实验动物 | 第18页 |
·菌种和质粒 | 第18-19页 |
·主要实验仪器和设备 | 第19页 |
·实验试剂 | 第19页 |
·溶液配制 | 第19-20页 |
·实验方法与操作 | 第20-27页 |
·总RNA 的提取 | 第20页 |
·反转录合成cDNA 模板 | 第20-21页 |
·引物设计 | 第21-22页 |
·PCR 扩增草鱼脑芳香化酶部分cDNA 序列 | 第22页 |
·RACE 操作 | 第22-25页 |
·目的基因片断的克隆与测序 | 第25-27页 |
·生物信息学分析 | 第27页 |
·组织分布情况 | 第27页 |
·实验结果 | 第27-33页 |
·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 部分序列的克隆 | 第27-28页 |
·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 3’端序列的克隆 | 第28-29页 |
·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 5’端序列的克隆 | 第29-33页 |
·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)mRNA 在组织以及脑的不同区域中的表达 | 第33页 |
·讨论 | 第33-36页 |
第三章 草鱼脑芳香化酶启动子的分离与报告质粒构建 | 第36-52页 |
·实验材料 | 第36-38页 |
·动物组织、菌种和质粒 | 第36-37页 |
·主要实验仪器和设备 | 第37页 |
·实验试剂 | 第37页 |
·溶液配制 | 第37-38页 |
·实验方法与操作 | 第38-46页 |
·草鱼基因组DNA 的提取 | 第38页 |
·基因步移文库的构建 | 第38-40页 |
·引物设计 | 第40-41页 |
·基因步移PCR 扩增启动子序列 | 第41-43页 |
·生物信息学分析 | 第43页 |
·启动子报告基因的构建 | 第43-46页 |
·实验结果 | 第46-50页 |
·草鱼脑芳香化酶5’端上游调控序列的分子克隆 | 第46-48页 |
·草鱼脑芳香化酶5’端上游调控序列的序列分析 | 第48-50页 |
·荧光素酶报告质粒的构建 | 第50页 |
·讨论 | 第50-52页 |
第四章 草鱼脑芳香化酶启动子活性检测 | 第52-66页 |
·实验材料 | 第52-53页 |
·细胞株 | 第52页 |
·主要试剂及其配制 | 第52-53页 |
·实验仪器 | 第53页 |
·实验方法 | 第53-57页 |
·C6 大鼠脑瘤细胞的培养 | 第53-54页 |
·质粒DNA 的抽提 | 第54页 |
·转染条件的优化 | 第54-55页 |
·细胞瞬时转染以及药物处理 | 第55-56页 |
·细胞瞬时转染实验 | 第55-56页 |
·细胞的药物处理 | 第56页 |
·细胞样品的收集及检测 | 第56-57页 |
·细胞样品的收集 | 第56-57页 |
·启动子活性检测 | 第57页 |
·统计结果分析 | 第57页 |
·实验结果 | 第57-63页 |
·PEI 转染条件的优化 | 第57-58页 |
·体外检测草鱼脑芳香化酶基因启动子基本活性 | 第58-60页 |
·PACAP 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响 | 第60页 |
·GTH 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响 | 第60-61页 |
·STH 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响 | 第61-62页 |
·Activin 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响 | 第62-63页 |
·讨论 | 第63-66页 |
致谢 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-76页 |
攻硕期间取得的研究成果 | 第76-77页 |