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草鱼脑芳香化酶的cDNA克隆、启动子分离与转录活性的调控

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
第一章 绪论第11-18页
   ·CYP19 基因和 P450arom 的结构第11-14页
     ·细胞色素P450 家族与CYP19 基因第11-12页
     ·细胞色素P450 芳香化酶结构以及作用机理第12-14页
   ·芳香化酶的分布第14-15页
     ·芳香化酶在哺乳动物体内的表达分布第14页
     ·鱼类组织中芳香化酶的表达第14-15页
   ·芳香化酶的表达与调控第15-17页
     ·雌激素对芳香化酶的表达调控第15-16页
     ·雄性激素对芳香化酶的调节第16页
     ·依赖于CREB(cAMP 反应元件结合蛋白)对芳香化酶的调节第16页
     ·核受体对芳香化酶的调节作用第16-17页
   ·本课题研究目的和内容第17-18页
第二章 草鱼脑芳香化酶的 cDNA 克隆第18-36页
   ·实验材料第18-20页
     ·实验动物第18页
     ·菌种和质粒第18-19页
     ·主要实验仪器和设备第19页
     ·实验试剂第19页
     ·溶液配制第19-20页
   ·实验方法与操作第20-27页
     ·总RNA 的提取第20页
     ·反转录合成cDNA 模板第20-21页
     ·引物设计第21-22页
     ·PCR 扩增草鱼脑芳香化酶部分cDNA 序列第22页
     ·RACE 操作第22-25页
     ·目的基因片断的克隆与测序第25-27页
     ·生物信息学分析第27页
     ·组织分布情况第27页
   ·实验结果第27-33页
     ·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 部分序列的克隆第27-28页
     ·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 3’端序列的克隆第28-29页
     ·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)cDNA 5’端序列的克隆第29-33页
     ·草鱼脑芳香化酶(gcP450aromB)mRNA 在组织以及脑的不同区域中的表达第33页
   ·讨论第33-36页
第三章 草鱼脑芳香化酶启动子的分离与报告质粒构建第36-52页
   ·实验材料第36-38页
     ·动物组织、菌种和质粒第36-37页
     ·主要实验仪器和设备第37页
     ·实验试剂第37页
     ·溶液配制第37-38页
   ·实验方法与操作第38-46页
     ·草鱼基因组DNA 的提取第38页
     ·基因步移文库的构建第38-40页
     ·引物设计第40-41页
     ·基因步移PCR 扩增启动子序列第41-43页
     ·生物信息学分析第43页
     ·启动子报告基因的构建第43-46页
   ·实验结果第46-50页
     ·草鱼脑芳香化酶5’端上游调控序列的分子克隆第46-48页
     ·草鱼脑芳香化酶5’端上游调控序列的序列分析第48-50页
     ·荧光素酶报告质粒的构建第50页
   ·讨论第50-52页
第四章 草鱼脑芳香化酶启动子活性检测第52-66页
   ·实验材料第52-53页
     ·细胞株第52页
     ·主要试剂及其配制第52-53页
     ·实验仪器第53页
   ·实验方法第53-57页
     ·C6 大鼠脑瘤细胞的培养第53-54页
     ·质粒DNA 的抽提第54页
     ·转染条件的优化第54-55页
     ·细胞瞬时转染以及药物处理第55-56页
       ·细胞瞬时转染实验第55-56页
       ·细胞的药物处理第56页
     ·细胞样品的收集及检测第56-57页
       ·细胞样品的收集第56-57页
       ·启动子活性检测第57页
     ·统计结果分析第57页
   ·实验结果第57-63页
     ·PEI 转染条件的优化第57-58页
     ·体外检测草鱼脑芳香化酶基因启动子基本活性第58-60页
     ·PACAP 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响第60页
     ·GTH 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响第60-61页
     ·STH 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响第61-62页
     ·Activin 对草鱼脑芳香化酶启动子活性的影响第62-63页
   ·讨论第63-66页
致谢第66-67页
参考文献第67-76页
攻硕期间取得的研究成果第76-77页

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