| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-14页 |
| ·氧化应激的概述 | 第9页 |
| ·糖尿病氧化应激的产生 | 第9页 |
| ·氧化应激对糖尿病的影响 | 第9-10页 |
| ·抗氧化治疗的应用前景 | 第10-12页 |
| ·穿心莲内酷及其抗氧化作用 | 第10-11页 |
| ·硫辛酸及其生物学作用 | 第11-12页 |
| ·蛋白质组学及蛋白质组学技术 | 第12-14页 |
| ·蛋白组概述 | 第12页 |
| ·蛋白组学研究技术 | 第12-14页 |
| 第二章 技术路线 | 第14-15页 |
| 第三章 材料与方法 | 第15-33页 |
| ·主要材料 | 第15页 |
| ·细胞系 | 第15页 |
| ·穿心莲内酯衍生物AL-1 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15-17页 |
| ·细胞培养 | 第15页 |
| ·双向电泳试剂 | 第15-16页 |
| ·质谱鉴定试剂 | 第16页 |
| ·Western-blot试剂 | 第16-17页 |
| ·其他试剂 | 第17页 |
| ·生物信息学软件 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·相关溶液的配制 | 第18-24页 |
| ·双向电泳试剂配制 | 第18-21页 |
| ·银染染色液(以下配制均为两块胶用量) | 第21页 |
| ·蛋白质酶解及质谱溶液 | 第21-22页 |
| ·Western blot试剂配方 | 第22-24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·细胞培养 | 第25页 |
| ·MTT实验 | 第25页 |
| ·荧光显微镜检测细胞凋亡 | 第25页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第25-26页 |
| ·用药胰岛RIN-mβ细胞培养 | 第26页 |
| ·细胞总蛋白裂解和提取 | 第26页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第26-27页 |
| ·二维电泳 | 第27-28页 |
| ·图像扫描与分析 | 第28-29页 |
| ·差异表达蛋白质酶解 | 第29页 |
| ·质谱鉴定 | 第29-30页 |
| ·差异表达蛋白质的功能分类 | 第30页 |
| ·AL-1处理前后胰岛RIN-mβ细胞蛋白变化的Western Blot验证 | 第30-31页 |
| ·荧光酶标仪检测AL-1处理前后胰岛RIN-mβ细胞内活性氧(ROS)的变化 | 第31页 |
| ·Western blot检测AL-1对Akt,ERK信号通路的影响 | 第31页 |
| ·蛋白质的网络关系图 | 第31页 |
| ·AL-1抗H_2O_2诱导的细胞凋亡作用 | 第31页 |
| ·统计学处理 | 第31-33页 |
| 第四章 结果 | 第33-49页 |
| ·MTT检测AL-1对细胞的保护作用 | 第33页 |
| ·AL-1减轻H_2O_2导致的凋亡核型变化 | 第33-34页 |
| ·细胞仪检测AL-1降低H_2O_2导致的胰岛RIN-mβ细胞凋亡 | 第34-35页 |
| ·AL-1对H_2O_2所致胰岛RIN-mβ细胞损伤抗氧化蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| ·Bradford法测蛋白浓度 | 第36-37页 |
| ·AL-1处理胰岛RIN-mβ细胞前后的2-DE结果 | 第37-38页 |
| ·差异蛋白质的质谱鉴定 | 第38-40页 |
| ·差异蛋白的功能分类 | 第40-42页 |
| ·Western blot验证2DE结果中的部分差异蛋白 | 第42-43页 |
| ·AL-1调节抗氧化蛋白实现抗凋亡的作用 | 第43页 |
| ·AL-1处理胰岛RIN-mβ细胞后ROS的变化 | 第43-44页 |
| ·活性氧ROS的来源 | 第44页 |
| ·Akt/PKB,ERK与鉴定的蛋白质的网络关系图 | 第44-45页 |
| ·AL-1激活AKT,ERK信号转导通路 | 第45-46页 |
| ·AL-1抗H_2O_2诱导的细胞凋亡作用 | 第46-49页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第49-58页 |
| ·穿心莲内酯衍生物AL-1对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡保护作用 | 第49页 |
| ·药物AL-1处理后胰岛RIN-mβ细胞蛋白质组学的变化及意义 | 第49-55页 |
| ·Thioredoxin(Trx),Peroxiredoxin(Prx)等抗氧化蛋白 | 第49-51页 |
| ·Gclm | 第51页 |
| ·14-3-3 | 第51-52页 |
| ·RHO-GDI 1 | 第52-53页 |
| ·DJ-1 | 第53-54页 |
| ·hnRNP A_2B_1 | 第54页 |
| ·HSP | 第54-55页 |
| ·AL-1增强NAD(P)H氧化酶活性导致ROS升高,激活Akt,ERK细胞信号转导通路 | 第55-56页 |
| ·AL-1保护作用的机理 | 第56-58页 |
| 第六章 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 在学期间发表文章 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
