| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·花药、绒毡层发育的研究概述 | 第14-24页 |
| ·水稻花药发育的时期 | 第14-19页 |
| ·花药绒毡层细胞程序性死亡研究进展 | 第19-21页 |
| ·影响绒毡层发育的关键基因 | 第21-24页 |
| ·拟南芥中影响绒毡层发育的关键基因 | 第21-22页 |
| ·水稻中影响绒毡层发育的关键基因 | 第22-24页 |
| ·花药发育相关基因TDR的研究背景 | 第24-26页 |
| ·花药发育异常tdr突变体的筛选及TDR基因的分离 | 第24-25页 |
| ·TDR基因下游基因的筛选 | 第25-26页 |
| ·水稻F-box蛋白及其生物学功能 | 第26-31页 |
| ·F-box蛋白的结构 | 第26-27页 |
| ·F-box蛋白的功能 | 第27-28页 |
| ·水稻中已有的F-box基因功能报道 | 第28-29页 |
| ·其它物种中已有的F-box基因功能报道 | 第29页 |
| ·花发育相关的F-box蛋白 | 第29-31页 |
| ·本课题的研究目的、意义 | 第31-33页 |
| 第二章 OsADF与水稻TDR相互作用关系的验证 | 第33-52页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-42页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·水稻材料 | 第33页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·试剂和仪器 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-42页 |
| ·ChIP-PCR检验OsADF与TDR的作用关系 | 第34-35页 |
| ·EMSA方法检验OsADF与TDR的作用关系 | 第35-38页 |
| ·TDR promoter-OsADF载体构建 | 第38页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化操作 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40页 |
| ·RNA的抽提 | 第40页 |
| ·RNA反转录cDNA | 第40-41页 |
| ·qRT-PCR表达水平检测 | 第41页 |
| ·水稻总DNA抽提 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·ChIP-PCR验证OsADF与TDR的作用关系 | 第42-43页 |
| ·OsADF启动子序列及其基序(Motifs)分析 | 第42页 |
| ·ChIP-qPCR初步验证OsADF受TDR调控 | 第42-43页 |
| ·EMSA方法验证OsADF与TDR的作用关系 | 第43-46页 |
| ·EMSA探针克隆 | 第43-44页 |
| ·EMSA探针灵敏度检测 | 第44-45页 |
| ·TDR全长蛋白诱导及SDS-PAGE检测 | 第45-46页 |
| ·EMSA进一步验证OsADF受TDR调控 | 第46页 |
| ·OsADF在tdr突变体中的表达分析及表型鉴定 | 第46-50页 |
| ·TDR promoter-OsADF的载体构建及转基因植株的获得 | 第46-47页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第47-48页 |
| ·OsADF在tdr突变体中的表达水平 | 第48-49页 |
| ·转基因植株表型观察 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 OsADF基因功能研究 | 第52-74页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52-54页 |
| ·野生型材料 | 第52页 |
| ·菌株 | 第52页 |
| ·表达载体 | 第52-54页 |
| ·试剂和仪器 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-59页 |
| ·进化树的构建 | 第54页 |
| ·水稻总DNA抽提 | 第54页 |
| ·水稻组织RNA提取 | 第54页 |
| ·T-DNA插入突变体鉴定 | 第54-55页 |
| ·OsADF干扰表达载体构建 | 第55-56页 |
| ·过量表达载体构建 | 第56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第56页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第56页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化操作 | 第56页 |
| ·PCR检测转基因植株 | 第56-57页 |
| ·Southern检测转基因植株 | 第57页 |
| ·转基因植株表型分析 | 第57-58页 |
| ·半薄切片技术 | 第58页 |
| ·半定量RT-PCR | 第58页 |
| ·实时定量RT-PCR实验 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-72页 |
| ·OsADF是F-Box蛋白家族成员 | 第59-64页 |
| ·突变体基因型和表型鉴定 | 第64-65页 |
| ·突变体插入位点分析 | 第64页 |
| ·突变体表型鉴定 | 第64-65页 |
| ·转基因植株的获得 | 第65-66页 |
| ·过量转基因株系PCR检测及表型观察 | 第66-68页 |
| ·OsADF干扰转基因株系PCR检测及表型观察 | 第68-72页 |
| ·OsADF基因沉默后的表达水平检测 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 OsADF基因表达模式分析 | 第74-86页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-80页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·水稻材料 | 第74页 |
| ·菌株 | 第74页 |
| ·表达载体 | 第74-75页 |
| ·试剂和仪器 | 第75-76页 |
| ·试剂 | 第75-76页 |
| ·仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·RT-PCR分析 | 第76页 |
| ·qRT-PCR实验 | 第76-77页 |
| ·OsADF promoter-GUS载体构建 | 第77页 |
| ·部分酶切 | 第77-78页 |
| ·GUS染色 | 第78页 |
| ·半薄切片 | 第78页 |
| ·振动切片 | 第78页 |
| ·原位杂交 | 第78-79页 |
| ·OsADF-YFP载体的构建 | 第79页 |
| ·洋葱表皮细胞的瞬时表达 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-85页 |
| ·OsADF基因的表达谱分析 | 第80-81页 |
| ·OsADF基因启动子表达模式分析 | 第81-83页 |
| ·OsADF基因在花药中的原位杂交分析 | 第83-84页 |
| ·原位探针灵敏度检测 | 第83页 |
| ·水稻花药原位杂交结果分析 | 第83-84页 |
| ·OsADF基因的亚细胞定位分析 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第86-90页 |
| ·TDR直接调节OsADF基因的表达来影响绒粘层细胞的PCD进程 | 第86-87页 |
| ·OsADF基因可能参与泛素蛋白降解途径调节PCD进程 | 第87页 |
| ·OsADF基因在水稻花粉发育过程中所处的位置 | 第87-88页 |
| ·利用不育基因创制新型不育材料 | 第88-89页 |
| ·工作展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 附录1:缩略词英汉对照 | 第104-105页 |
| 附录2:主要试剂配方 | 第105-110页 |
| 作者简历 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
