摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
课题基金资助 | 第8-11页 |
缩略词 | 第11-12页 |
前言 | 第12-14页 |
第一章 材料与方法 | 第14-28页 |
1 随机肽库与菌株 | 第14页 |
2 寄生虫和实验动物来源 | 第14页 |
3 主要仪器 | 第14页 |
4 主要试剂及器材 | 第14-15页 |
5 ER2738大肠杆菌准备 | 第15-16页 |
·主要试剂配制 | 第15-16页 |
·具体操作步骤 | 第16页 |
6 噬菌斑计数法 | 第16-18页 |
·主要试剂配制 | 第16页 |
·具体操作步骤 | 第16-18页 |
7 噬菌体的扩增与纯化 | 第18-19页 |
·主要试剂配制 | 第18页 |
·具体操作步骤 | 第18-19页 |
8 噬菌体随机12肽库对日本血吸虫肝期童虫的亲和筛选 | 第19-21页 |
·主要试剂配制 | 第19页 |
·肝期童虫的收集 | 第19页 |
·技术路线 | 第19-20页 |
·具体操作步骤 | 第20-21页 |
9 噬菌体DNA制备和DNA序列测定 | 第21-22页 |
·主要试剂配制 | 第21页 |
·具体操作步骤 | 第21-22页 |
10 噬菌体表面展示的短肽的生物信息学分析 | 第22-23页 |
·跟据DNA测序结果推测其编码的12个氨基酸序列 | 第22-23页 |
·氨基酸序列同源性分析 | 第23页 |
11 免疫组织化学检测目标噬菌体结合 | 第23-24页 |
·主要试剂配制 | 第23页 |
·具体操作步骤 | 第23-24页 |
12 Western blot检测目标噬菌体结合 | 第24-27页 |
·主要试剂配制 | 第24-26页 |
·具体操作步骤 | 第26-27页 |
13 体内回输试验验证目标噬菌体对体内虫体的靶向结合能力 | 第27-28页 |
·噬菌体体内代谢实验 | 第27页 |
·体内回输试验验证目标噬菌体对体内虫体的靶向结合能力 | 第27-28页 |
第二章 结果 | 第28-35页 |
1 噬菌体十二肽库的库容鉴定 | 第28页 |
2 阳性噬菌体的富集分析 | 第28-29页 |
3 噬菌体单链DNA的序列测定及其氨基酸序列推导 | 第29页 |
4 氨基酸序列同源性分析 | 第29-30页 |
5 阳性噬菌体ZW-15与Sj肝期童虫表膜结合的免疫组化结果 | 第30-31页 |
6 Western blot检测阳性噬菌体ZW-15与Sj肝期童虫表膜的结合 | 第31-32页 |
7 阳性噬菌体ZW-15与体内Sj肝期童虫表膜结合的试验结果 | 第32-35页 |
·噬菌体体内代谢实验结果 | 第32-34页 |
·阳性噬菌体ZW-15与体内Sj肝期童虫表膜结合的回输试验结果 | 第34-35页 |
第三章 讨论 | 第35-40页 |
1 血吸虫表膜的研究及标本选择 | 第35页 |
2 噬菌体展示技术筛选Sj肝期活童虫表膜特异结合肽的意义 | 第35-36页 |
3 实验方法及结果分析 | 第36-37页 |
4 肽库筛选条件的优化 | 第37-38页 |
·洗涤剂的浓度及洗涤时间 | 第37页 |
·温度 | 第37-38页 |
·洗脱时间 | 第38页 |
·筛选的轮次 | 第38页 |
5 肽库筛选中常遇到的问题及解决方案 | 第38-39页 |
·野生型噬菌体的污染 | 第38页 |
·扩增的噬菌体滴定较低 | 第38-39页 |
·非特异性结合噬菌体的去除 | 第39页 |
6 进一步工作展望 | 第39-40页 |
第四章 结论 | 第40-41页 |
参考文献 | 第41-46页 |
综述 | 第46-55页 |
1 利用噬菌体展示技术筛选血吸虫抗原模拟表位并评估其免疫效果 | 第46-47页 |
2 利用噬菌体展示cDNA文库筛选血吸虫的新抗原基因 | 第47页 |
3 将噬菌体直接用作血吸虫病疫苗载体 | 第47-48页 |
4 利用噬菌体展示技术筛选血吸虫病靶向治疗载体 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-55页 |
致谢 | 第55-56页 |
攻读学位期间主要的研究成果 | 第56-57页 |
附录 | 第57页 |