| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 第1章 文献综述 | 第19-51页 |
| ·冷胁迫是限制玉米生产的重要的非生物胁迫之一 | 第20页 |
| ·冷害 | 第20-21页 |
| ·冷害的类型 | 第20-21页 |
| ·冷害机理 | 第21页 |
| ·低温对玉米生长的影响 | 第21-25页 |
| ·低温对玉米生理的影响 | 第21-24页 |
| ·冷胁迫对根系统的影响 | 第24-25页 |
| ·植物抗冷机理的研究进展 | 第25-36页 |
| ·植物抗冷相关基因 | 第25-26页 |
| ·植物低温信号转导途径 | 第26-36页 |
| ·DNA 甲基化的研究进展 | 第36-39页 |
| ·DNA 甲基化 | 第36页 |
| ·DNA 甲基化机制 | 第36-37页 |
| ·DNA 甲基化在植物响应胁迫中的作用 | 第37-39页 |
| ·MicroRNA 研究进展 | 第39-50页 |
| ·植物MicroRNA 的生物合成 | 第40页 |
| ·MicroRNA 对植物基因的调节机制 | 第40-42页 |
| ·植物生长发育相关的MicroRNA | 第42-45页 |
| ·与信号转导相关的MicroRNA | 第45-46页 |
| ·与植物病害相关的MicroRNA | 第46-47页 |
| ·与植物环境胁迫相关的MicroRNA | 第47-48页 |
| ·MicroRNA的分离 | 第48-50页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第50-51页 |
| 第2章 玉米抗冷种质资源的筛选与鉴定 | 第51-63页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51页 |
| ·试验所需试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·6℃低温发芽试验 | 第54-55页 |
| ·4℃低温发芽 | 第55-56页 |
| ·苗期低温筛选 | 第56页 |
| ·生理生化指标的测定 | 第56-57页 |
| ·田间验证 | 第57-58页 |
| ·地温测定 | 第58页 |
| ·EST-PCR 和SSR 分子标记的开发 | 第58-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| 第3章 利用cDNA-AFLP 技术分析玉米冷胁迫下基因表达 | 第63-95页 |
| ·材料与方法 | 第63-76页 |
| ·菌种与载体 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-64页 |
| ·试验所需试剂及培养基的配制 | 第64-65页 |
| ·仪器 | 第65页 |
| ·植物材料 | 第65页 |
| ·冷胁迫处理 | 第65页 |
| ·总RNA 的提取 | 第65-66页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第66-67页 |
| ·cDNA-AFLP 程序 | 第67-71页 |
| ·目的带的回收 | 第71页 |
| ·再次PCR | 第71页 |
| ·目的片段的琼脂糖回收 | 第71-72页 |
| ·测序 | 第72-75页 |
| ·序列分析 | 第75页 |
| ·半定量 RT- PCR | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-92页 |
| ·RNA 的提取 | 第76-77页 |
| ·cDNA 合成 | 第77-78页 |
| ·cDNA-AFLP 分析 | 第78-79页 |
| ·利用cDNA-AFLP 对冷胁迫下玉米基因表达差异的分析 | 第79-81页 |
| ·TDF 的分类 | 第81-82页 |
| ·差异片段的回收测序 | 第82-84页 |
| ·序列分析 | 第84-89页 |
| ·玉米抗冷相关未知候选基因的同源性分析 | 第89-90页 |
| ·通过半定量RT-PCR 验证候选基因 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·结论 | 第94-95页 |
| 第4章 抗冷相关基因的克隆及序列分析 | 第95-113页 |
| ·材料与方法 | 第95-99页 |
| ·菌种 | 第95页 |
| ·试剂 | 第95-96页 |
| ·试验所需试剂及培养基的配制 | 第96页 |
| ·仪器 | 第96页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·冷胁迫处理 | 第96页 |
| ·RNA 提取和cDNA 第一链的合成 | 第96页 |
| ·玉米抗冷相关未知候选基因的克隆 | 第96-97页 |
| ·生物信息学分析 | 第97-98页 |
| ·Real-time RT-PCR 分析 | 第98-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-111页 |
| ·玉米抗冷相关未知候选基因的拼接 | 第99页 |
| ·玉米抗冷相关未知候选基因的克隆 | 第99-101页 |
| ·序列分析 | 第101-109页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第109-111页 |
| ·讨论 | 第111-112页 |
| ·结论 | 第112-113页 |
| 第5章 植物表达载体的构建及抗冷相关基因的转基因研究 | 第113-131页 |
| ·材料 | 第113-115页 |
| ·菌种和载体 | 第113-114页 |
| ·试剂 | 第114页 |
| ·仪器 | 第114页 |
| ·试验所需试剂及培养基的配制 | 第114-115页 |
| ·实验方法 | 第115-124页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第115-119页 |
| ·转化拟南芥的研究 | 第119-121页 |
| ·转基因植株的检测 | 第121-123页 |
| ·转化玉米的研究 | 第123-124页 |
| ·结果与分析 | 第124-129页 |
| ·基因ZmMAPKKK、ZmCLC-D 和ZmRLK 的克隆 | 第124页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第124-126页 |
| ·转入农杆菌的重组质粒PCR、酶切鉴定 | 第126-127页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第127页 |
| ·转基因植株的PCR 鉴定 | 第127页 |
| ·野生型拟南芥与转基因拟南芥抗冷性的比较 | 第127-128页 |
| ·利用农杆菌介导法转化玉米的研究 | 第128-129页 |
| ·讨论 | 第129页 |
| ·结论 | 第129-131页 |
| 第6章 玉米冷胁迫下基因组胞嘧啶甲基化的变化 | 第131-143页 |
| ·材料与方法 | 第131-134页 |
| ·菌种与载体 | 第131页 |
| ·试剂 | 第131页 |
| ·试验所需试剂及培养基的配制 | 第131页 |
| ·仪器 | 第131页 |
| ·植物材料 | 第131-132页 |
| ·冷胁迫处理 | 第132页 |
| ·基因组DNA 的提取与纯化 | 第132-133页 |
| ·MSAP 程序 | 第133-134页 |
| ·目的带的回收 | 第134页 |
| ·再次PCR 和琼脂糖回收 | 第134页 |
| ·测序及序列分析 | 第134页 |
| ·结果与分析 | 第134-141页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第134-135页 |
| ·MSAP 分析 | 第135-136页 |
| ·利用MSAP 对冷胁迫下玉米甲基化变化的分析 | 第136-138页 |
| ·差异片段的回收测序 | 第138-139页 |
| ·序列分析 | 第139-141页 |
| ·讨论 | 第141-142页 |
| ·结论 | 第142-143页 |
| 第7章 MicroRNA 在玉米抗冷中的作用 | 第143-181页 |
| ·材料 | 第143-144页 |
| ·试剂 | 第143页 |
| ·试验所需试剂及培养基的配制 | 第143-144页 |
| ·仪器 | 第144页 |
| ·植物材料 | 第144页 |
| ·冷胁迫处理 | 第144页 |
| ·实验方法 | 第144-151页 |
| ·MicroRNA 的分离 | 第144页 |
| ·RNA 提取和cDNA 第一链的合成 | 第144页 |
| ·高通量测序 | 第144-145页 |
| ·数据分析 | 第145-148页 |
| ·Real-time qRT-PCR 分析 | 第148-151页 |
| ·结果与分析 | 第151-175页 |
| ·RNA 的提取 | 第151-152页 |
| ·数据分析 | 第152-173页 |
| ·Real-time qRT-PCR 分析 | 第173-175页 |
| ·讨论 | 第175-179页 |
| ·结论 | 第179-181页 |
| 第8章 全文结论 | 第181-183页 |
| 参考文献 | 第183-215页 |
| 作者简介及科研成果 | 第215-217页 |
| 致谢 | 第217页 |
