| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 文献回顾 | 第17-32页 |
| 第一部分 自发髓母细胞瘤小鼠LNCRNA芯片分析 | 第32-53页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.2 细胞株 | 第32页 |
| 1.3 引物及siRNA合成 | 第32页 |
| 1.4 实验试剂及试剂盒 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-43页 |
| 2.1 SmoA1小鼠基因型及病理鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2 Arraystar小鼠LncRNA v3.0 芯片扫描及数据分析 | 第35-38页 |
| 2.3 差异表达基因及lncRNA的qRT-PCR验证 | 第38-40页 |
| 2.4 原位杂交实验 | 第40-41页 |
| 2.5 基因干涉实验 | 第41-42页 |
| 2.6 细胞及组织总蛋白提取 | 第42-43页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹实验 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-50页 |
| 3.1 SmoA1小鼠基因型鉴定及组织病理学检测 | 第43-45页 |
| 3.2 Arraystar小鼠lncRNA v3.0 芯片扫描及数据分析结果 | 第45-47页 |
| 3.3 野生型C57 BL/6 小鼠小脑组织及SmoA1小鼠髓母细胞瘤组织总RNA提取及基因表达验证 | 第47-49页 |
| 3.4 GLi1/2 干涉对Nkx2-2as表达的影响 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 第二部分 NKX2-2AS在髓母细胞瘤中的功能及发挥作用的机制研究 | 第53-81页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 细胞株 | 第53页 |
| 1.2 实验动物 | 第53页 |
| 1.3 菌种、质粒及引物 | 第53页 |
| 1.4 实验试剂 | 第53-54页 |
| 2 方法 | 第54-69页 |
| 2.1 Nkx2-2as过表达载体的构建及稳转细胞系的建立 | 第54-58页 |
| 2.2 细胞学实验验证Nkx2-2as功能 | 第58-59页 |
| 2.3 Nkx2-2as靶miRNA的预测和验证 | 第59-63页 |
| 2.4 Nkx2-2as靶miRNA下游靶基因的预测及验证 | 第63-64页 |
| 2.5 Dicer基因的干涉及BTG2和LATS1/2 的蛋白质免疫印迹检测 | 第64-65页 |
| 2.6 RNA-IP实验检测Ago2与Nkx2-2as相互作用 | 第65-68页 |
| 2.7 细胞学实验验证BTG2及LATS1/2 功能 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-78页 |
| 3.1 细胞学实验验证Nkx2-2as功能 | 第69-71页 |
| 3.2 Nkx2-2as靶miRNA预测及验证 | 第71-73页 |
| 3.3 MiRNA靶mRNA预测及验证 | 第73-75页 |
| 3.4 Nkx2-2as与BTG2和LATS1/2 的转录本竞争性结合于RISC复合物 | 第75-76页 |
| 3.5 细胞学实验验证BTG2及LATS1/2 功能 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| 第三部分 SHH信号通路抑制NKX2-2AS表达的分子机制 | 第81-90页 |
| 1 材料 | 第81-82页 |
| 1.1 细胞株 | 第81页 |
| 1.2 实验动物 | 第81页 |
| 1.3 菌种、质粒及引物 | 第81页 |
| 1.4 实验试剂 | 第81-82页 |
| 2 方法 | 第82-85页 |
| 2.1 对Nkx2-2as上游调控因子的预测 | 第82页 |
| 2.2 染色质免疫共沉淀ChIP实验检测Nkx2-2as启动子区转录因子 | 第82-84页 |
| 2.3 用Western blot检测相关分子的表达情况 | 第84-85页 |
| 2.4 对SmoA1小鼠髓母细胞瘤组织免疫组化染色 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-88页 |
| 3.1 Nkx2-2as启动子区相互作用转录因子筛选 | 第85-86页 |
| 3.2 FoxD1对Nkx2-2as表达的影响 | 第86-87页 |
| 3.3 Hedgehog信号通路对FoxD1表达的影响 | 第87-88页 |
| 3.4 FoxD1对Hedgehog信号通路对Nkx2-2as调节的影响 | 第88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 第四部分 SHH/NKX2-2AS调控通路在体内髓母细胞瘤发生发展中的作用 | 第90-96页 |
| 1 材料 | 第90-91页 |
| 1.1 实验动物 | 第90页 |
| 1.2 菌种、质粒及引物 | 第90页 |
| 1.3 实验样本 | 第90页 |
| 1.4 实验试剂 | 第90-91页 |
| 2 方法 | 第91页 |
| 2.1 Nkx2-2as过表达Daoy细胞裸鼠皮下成瘤实验 | 第91页 |
| 2.2 Nkx2-2as过表达SmoA1小鼠生存期分析 | 第91页 |
| 2.3 Nkx2-2as过表达SmoA1小鼠MicroCT检查 | 第91页 |
| 2.4 人髓母细胞瘤组织芯片免疫组化染色分析 | 第91页 |
| 3 结果 | 第91-94页 |
| 3.1 裸鼠皮下成瘤实验检测Nkx2-2as对Daoy细胞成瘤能力的影响 | 第91-92页 |
| 3.2 Nkx2-2as对SmoA1小鼠生存期的影响 | 第92-93页 |
| 3.3 Nkx2-2as对SmoA1小鼠颅骨形态的影响 | 第93页 |
| 3.4 人髓母细胞瘤组织芯片中相关分子表达检测 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| 小结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-108页 |
| 附录 | 第108-111页 |
| 个人简历及研究成果 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
