| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 1 导论 | 第9-19页 |
| 1.1 Hfq蛋白简介 | 第9-13页 |
| 1.1.1 Hfq的发现及其结构基础 | 第9-11页 |
| 1.1.2 Hfq的生物学功能 | 第11-13页 |
| 1.2 滞留菌的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 滞留菌的发现和定义 | 第14页 |
| 1.2.2 滞留菌的形成机制 | 第14-16页 |
| 1.2.3 Hfq与滞留的关系 | 第16-17页 |
| 1.3 研究内容、目的及意义 | 第17-18页 |
| 1.4 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 本实验所用引物 | 第19-20页 |
| 2.1.3 分子生物操作技术常用酶及试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.4 常用生化试剂与药品 | 第20页 |
| 2.1.5 培养基及实验室常用试剂配方 | 第20-22页 |
| 2.1.6 仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 菌种的活化与保藏 | 第23页 |
| 2.2.2 质粒和基因组的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR扩增条件和体系 | 第24页 |
| 2.2.4 DNA片段回收 | 第24-25页 |
| 2.2.5 限制性内切酶酶切体系及方法 | 第25页 |
| 2.2.6 T4 DNA Ligase连接反应体系及方法 | 第25-26页 |
| 2.2.7 大肠杆菌电转化感受态的制备 | 第26页 |
| 2.2.8 大肠杆菌的电击转化 | 第26-27页 |
| 2.2.9 重组子的筛选与鉴定 | 第27页 |
| 2.2.10 双亲接合 | 第27-28页 |
| 2.2.11 hfq基因敲除菌株筛选 | 第28页 |
| 2.2.12 RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.13 敲除株中hfq转录水平的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.14 实时定量PCR | 第30页 |
| 2.2.15 生长曲线的测定 | 第30页 |
| 2.2.16 MIC/MBC测定 | 第30-31页 |
| 2.2.17 药敏曲线的测定 | 第31-33页 |
| 3 实验结果与分析 | 第33-42页 |
| 3.1 维氏气单胞菌hfq 敲除株构建 | 第33-37页 |
| 3.1.1 hfq敲除载体构建 | 第33-35页 |
| 3.1.2 hfq缺失突变株构建 | 第35页 |
| 3.1.3 敲除株中hfq基因转录水平检测 | 第35-37页 |
| 3.2 hfq敲除对滞留形成的影响 | 第37-42页 |
| 3.2.1 生长曲线测定 | 第37-38页 |
| 3.2.2 MIC/MBC测定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 药敏曲线测定 | 第39-40页 |
| 3.2.4 滞留相关基因实时定量检测 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-48页 |
| 4.1 维氏气单胞菌hfq敲除株的构建 | 第42-43页 |
| 4.2 hfq敲除对细菌滞留的影响 | 第43-48页 |
| 4.2.1 生长曲线 | 第43页 |
| 4.2.2 MIC/MBC及药敏曲线 | 第43-44页 |
| 4.2.3 RT-qPCR | 第44-48页 |
| 5 总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 缩略语表 | 第56-57页 |
| 基金项目资助 | 第57-58页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |