| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| 1.1 肝纤维化概述 | 第14-22页 |
| 1.1.1 肝脏疾病的发展现状 | 第14页 |
| 1.1.2 肝硬化是肝纤维化不断进展的结果 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肝纤维化的发病机制 | 第15-19页 |
| 1.1.3.1 肝星状细胞的活化是肝纤维化发展的中心事件 | 第15-18页 |
| 1.1.3.2 活性氧涉及的氧化应激参与肝纤维的发展 | 第18-19页 |
| 1.1.4 肝纤维化的检测手段 | 第19-20页 |
| 1.1.5 肝纤维化检测的几个标志物 | 第20-22页 |
| 1.2 Nucleophosmin的研究现状 | 第22-25页 |
| 1.2.1 Nucleophosmin的基因结构及生物学功能 | 第22-24页 |
| 1.2.2 Nucleophosmin在肿瘤疾病中有异常表达现象 | 第24-25页 |
| 1.3 本论文具体研究方案及科学意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-43页 |
| 2.1 试剂、材料与主要仪器 | 第27-31页 |
| 2.1.1 试剂和材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 生物材料 | 第28页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第28-30页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-43页 |
| 2.2.1 稳定表达细胞株筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.2 Western blot分析 | 第32-34页 |
| 2.2.3 细胞划痕实验 | 第34页 |
| 2.2.4 Transwell实验 | 第34-35页 |
| 2.2.5 MTT细胞增殖实验 | 第35页 |
| 2.2.6 CCK-8细胞增殖实验 | 第35页 |
| 2.2.7 流式检测细胞周期实验 | 第35-36页 |
| 2.2.8 流式检测细胞凋亡实验 | 第36-37页 |
| 2.2.9 细胞活性氧检测实验 | 第37页 |
| 2.2.10 质粒DNA转化实验 | 第37-38页 |
| 2.2.11 碱裂解法提取质粒DNA | 第38-39页 |
| 2.2.12 SiRNA转染真核细胞 | 第39页 |
| 2.2.13 实时荧光定量PCR (Quantitative RT-PCR) | 第39-42页 |
| 2.2.14 数据处理 | 第42-43页 |
| 第三章 实验结果 | 第43-65页 |
| 3.1 在TGF-β诱导LX-2细胞过程中,Nucleophosmin蛋白表达上调 | 第43-46页 |
| 3.1.1 不同浓度的TGF-β1诱导LX-2细胞,Nucleophosmin蛋白表达与ACTA2蛋白表达均上调 | 第43-45页 |
| 3.1.2 TGF-β1诱导LX-2细胞不同时间,Nucleophosmin蛋白表达与ACTA2蛋白表达均上调 | 第45-46页 |
| 3.2 TGF-β1诱导LX-2细胞时对p-AKT/p-mTOR通路有激活作用 | 第46-48页 |
| 3.2.1 不同浓度的TGF-β1诱导LX-2细胞,p-AKT/p-mTOR蛋白表达上调 | 第46-47页 |
| 3.2.2 TGF-β1处理LX-2细胞不同时间,p-AKT/p-mTOR蛋白表达上调 | 第47-48页 |
| 3.3 TGF-β诱导LX-2细胞时,对细胞内活性氧和细胞周期的影响 | 第48-50页 |
| 3.4 降低Nucleophosmin在肝星状细胞中的表达,对肝星状细胞的表型和肝纤维化标志物表达均有抑制作用 | 第50-57页 |
| 3.4.1 采用CRISPAR-Cas9技术敲除Nucleophosmin,ACTA2等肝纤维化标志物表达受到抑制 | 第50-55页 |
| 3.4.2 采用SiRNA技术沉默Nucleophosmin,ACTA2等肝纤维化标志物表达受到抑制 | 第55-57页 |
| 3.5 NPM抑制剂NSC348884处理LX-2细胞对肝纤维化进程的影响 | 第57-61页 |
| 3.5.1 NSC348884处理LX-2细胞,对肝纤维化标志物ACTA2表达有抑制作用 | 第57-58页 |
| 3.5.2 通过流式细胞仪技术检测NSC348884处理LX-2细胞,细胞周期、细胞凋亡及活性氧变化情况 | 第58-61页 |
| 3.6 AKT抑制剂MK2206处理LX-2细胞对肝纤维化进程的影响 | 第61-65页 |
| 3.6.1 MK2206处理LX-2细胞,对肝纤维化标志物ACTA2表达有抑制作用 | 第61-62页 |
| 3.6.2 通过流式细胞仪技术检测MK2206处理LX-2细胞,细胞周期、细胞凋亡及活性氧变化情况 | 第62-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-73页 |
| 4.1 Nucleophosmin在肝星状细胞中的的功能作用 | 第65-67页 |
| 4.2 Nucleophosmin在肝星状细胞活化发展中的作用 | 第67-71页 |
| 4.2.1 TGF-β诱导肝星状细胞活化涉及NPM表达上调 | 第67-68页 |
| 4.2.2 肝纤维化进展中NPM参与着活性氧的表达 | 第68-69页 |
| 4.2.3 在肝纤维化进展中NPM可能通过AKT的激活来参与肝纤维化形成 | 第69-71页 |
| 4.3 该课题研究的局限性和未来展望 | 第71-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
