| 摘要 | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 黑色素在动物皮肤中的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1 黑色素细胞的形成 | 第10页 |
| 1.2 黑色素的分类与合成途径 | 第10-11页 |
| 1.3 黑色素生成的有关信号转导途径 | 第11-14页 |
| 1.4 调控黑色素细胞的相关基因 | 第14-15页 |
| 2 角蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1 角蛋白的分类 | 第15页 |
| 2.2 角蛋白在毛囊中的表达 | 第15页 |
| 2.3 角蛋白基因表达的调控 | 第15-16页 |
| 2.4 KRT2基因与黑色素的关系 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-19页 |
| 1.1 试验动物及取材 | 第17页 |
| 1.2 主要仪器耗材 | 第17页 |
| 1.3 细胞培养所需试剂 | 第17-18页 |
| 1.4 过表达载体构建所需试剂 | 第18页 |
| 1.5 总RNA提取、普通PCR、荧光定量PCR所用试剂 | 第18页 |
| 1.6 蛋白免疫印记所用其他相关试剂 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-29页 |
| 2.1 黑色素细胞的培养 | 第19-20页 |
| 2.2 免疫组织化学实验方法 | 第20页 |
| 2.2.1 石蜡切片的制备 | 第20页 |
| 2.2.2 免疫组织化学 | 第20页 |
| 2.2.3 图像分析 | 第20页 |
| 2.3 qRT-PCR实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 羊驼皮肤及黑色素细胞总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.3.2 反转录合成cDNA | 第21页 |
| 2.3.3 PCR引物设计 | 第21-22页 |
| 2.3.4 反应体系 | 第22-23页 |
| 2.3.5 qRT-PCR数据分析 | 第23页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹实验方法 | 第23-26页 |
| 2.4.1 羊驼皮肤组织及黑色素细胞中总蛋白的提取 | 第23-24页 |
| 2.4.2 蛋白样品浓度的测定 | 第24页 |
| 2.4.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 2.4.4 转膜 | 第25页 |
| 2.4.5 封闭与杂交 | 第25-26页 |
| 2.4.6 显色 | 第26页 |
| 2.4.7 Western blotting图像分析 | 第26页 |
| 2.5 细胞转染方法 | 第26-27页 |
| 2.5.1 pmirGLO-KRT2过表达载体质粒的构建 | 第26页 |
| 2.5.2 pmirGLO-KRT2过表达载体的提取 | 第26-27页 |
| 2.5.3 pmirGLO-KRT2过表达载体转染羊驼皮肤黑色素细胞 | 第27页 |
| 2.6 黑色素含量的测定 | 第27-29页 |
| 实验结果 | 第29-41页 |
| 3.1 免疫组织化学结果 | 第29-30页 |
| 3.2 KRT2基因对不同毛色羊驼皮肤中mRNA相对表达量变化 | 第30-32页 |
| 3.3 KRT2基因对不同毛色羊驼皮肤中蛋白相对表达量变化 | 第32-33页 |
| 3.4 pmirGLO-KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞含量的影响 | 第33-34页 |
| 3.5 羊驼黑色素细胞内pmirGLO-KRT2基因和蛋白水平的表达 | 第34-37页 |
| 3.6 转染pmirGLO-KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞内Mitf、Tyr和Tyrp1在转录水平的表达 | 第37-39页 |
| 3.7 转染pmirGLO-KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞内Mitf、Tyr和Tyrp1在蛋白水平的表达 | 第39-41页 |
| 讨论 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| Abstract | 第49页 |
| 附录 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
