| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1 植物与病原菌的相互作用 | 第14-24页 |
| 1.1 植物的免疫系统 | 第14-19页 |
| 1.1.1 分子模式诱导的免疫反应(PTI) | 第15-18页 |
| 1.1.2 效应分子诱导的免疫反应(ETI) | 第18-19页 |
| 1.2 效应分子(Effector) | 第19-22页 |
| 1.3 系统获得抗性(Systemicacquiredresistance,SAR) | 第22-24页 |
| 2 菌核病与核盘菌 | 第24-34页 |
| 2.1 核盘菌的分类地位及其为害 | 第24-26页 |
| 2.2 菌核病的防治 | 第26-27页 |
| 2.3 核盘菌的致病机理 | 第27-34页 |
| 2.3.1 水解酶类(Hydrolase) | 第28-30页 |
| 2.3.2 草酸 | 第30-32页 |
| 2.3.3 效应子(effector) | 第32-33页 |
| 2.3.4 其他致病相关蛋白 | 第33-34页 |
| 3 Cerato-platanin(CP)研究进展 | 第34-36页 |
| 4 研究内容和技术路线 | 第36-38页 |
| 第二章 核盘菌Cerato-platanin(CP)的鉴定和基因功能分析 | 第38-72页 |
| 1 材料与方法 | 第38-52页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-40页 |
| 1.1.1 试验菌株 | 第38-39页 |
| 1.1.2 试剂和培养基 | 第39-40页 |
| 1.2 试验方法 | 第40-52页 |
| 1.2.1 核盘菌中CP蛋白的生物学分析 | 第40-41页 |
| 1.2.2 载体构建 | 第41-43页 |
| 1.2.3 Total RNA的提取 | 第43页 |
| 1.2.4 第一链cDNA合成 | 第43-45页 |
| 1.2.5 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR) | 第45页 |
| 1.2.6 核盘菌Sscp1基因的末端克隆 | 第45-46页 |
| 1.2.7 Sscp1基因的表达量检测 | 第46页 |
| 1.2.8 核盘菌基因组DNA提取 | 第46-47页 |
| 1.2.9 Southern Blot分析 | 第47-48页 |
| 1.2.10 核盘菌Sscp1基因的敲除和互补 | 第48-49页 |
| 1.2.11 核盘菌原生质体制备 | 第49-50页 |
| 1.2.12 PEG介导的原生质体转化 | 第50页 |
| 1.2.13 农杆菌介导转化核盘菌 | 第50页 |
| 1.2.14 核盘菌子囊盘的诱导和子囊孢子的收集 | 第50-51页 |
| 1.2.15 核盘菌的生物学测定 | 第51页 |
| 1.2.15 核盘菌致病力测定 | 第51页 |
| 1.2.15 接种叶片组织细胞学观察(台盼蓝染色) | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-70页 |
| 2.1 真菌Cerato-platanin(CP)的分布 | 第52-54页 |
| 2.2 核盘菌Sscp1基因全长克隆与分析 | 第54页 |
| 2.3 核盘菌SsCP1蛋白的分析 | 第54-59页 |
| 2.4 核盘菌Sscp1基因的表达模式 | 第59-63页 |
| 2.5 真菌基因功能研究系列载体构建 | 第63页 |
| 2.6 Sscp1基因敲除突变体的获得与验证 | 第63-65页 |
| 2.7 Sscp1基因敲除突变体生物学特性 | 第65-67页 |
| 2.8 Sscp1基因敲除突变体致病力显著下降 | 第67-68页 |
| 2.9 拟南芥激素突变体对ΔSscp1突变体更加感病 | 第68-70页 |
| 3 结论与讨论 | 第70-72页 |
| 第三章 分泌蛋白SsCP1在核盘菌与寄主互作中的作用机制研究 | 第72-111页 |
| 1 材料与方法 | 第72-80页 |
| 1.1 试验材料 | 第72-73页 |
| 1.1.1 试验菌株 | 第72-73页 |
| 1.1.2 试剂和培养基 | 第73页 |
| 1.2 试验方法 | 第73-80页 |
| 1.2.1 携带蛋白标签的植物表达载体的构建 | 第73-74页 |
| 1.2.2 植物蛋白亚细胞定位的表达载体构建 | 第74页 |
| 1.2.3 基于TRV的病毒表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 1.2.4 农杆菌瞬时浸润烟草叶片 | 第75页 |
| 1.2.5 农杆菌介导转化拟南芥(浸花法) | 第75-76页 |
| 1.2.5 在本氏烟中瞬时表达Sscp1基因 | 第76页 |
| 1.2.6 病原菌的接种 | 第76-77页 |
| 1.2.7 免疫沉淀与蛋白质LC/MS | 第77-78页 |
| 1.2.8 酵母双杂交(Y2H) | 第78页 |
| 1.2.9 免疫共沉淀(Co-IP) | 第78页 |
| 1.2.10 荧光双分子互补(BIFC) | 第78-79页 |
| 1.2.11 植物中SA的提取和定量检测 | 第79-80页 |
| 1.2.12 电解质渗漏率的测定 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-107页 |
| 2.1 携带蛋白标签的植物表达载体 | 第80-83页 |
| 2.2 基于TRV的病毒表达系统 | 第83-84页 |
| 2.3 SsCP1可引起植物细胞死亡 | 第84-86页 |
| 2.4 35s:Sscp1转基因拟南芥的获得与验证 | 第86页 |
| 2.5 35S:Sscp1转基因拟南芥的内源水杨酸含量升高 | 第86-89页 |
| 2.6 35S:Sscp1转基因拟南芥的病原菌接种 | 第89-91页 |
| 2.7 SsCP1蛋白与植物病程相关蛋白1(PR1)互作 | 第91-96页 |
| 2.8 SsCP1与AtPR1蛋白共定位于细胞外质体 | 第96-97页 |
| 2.9 SsCP1蛋白与AtPR1蛋白的互作区域 | 第97-99页 |
| 2.10 SsCP1与AtPR1的保守结构域发生互作 | 第99-101页 |
| 2.11 35S:PR1转基因拟南芥提高了抗核盘菌的能力 | 第101-103页 |
| 2.12 SsCP1蛋白突变体的生物学功能 | 第103-107页 |
| 3 结论与讨论 | 第107-111页 |
| 第四章 结论与展望 | 第111-114页 |
| 4.1 全文结论 | 第111-112页 |
| 4.2 研究展望 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-139页 |
| 附录1 | 第139-157页 |
| 附录1.1 论文中所用的引物 | 第139-144页 |
| 附录1.2 Sscp1基因的全长cDNA序列 | 第144-145页 |
| 附录1.3 文中部分载体示意图 | 第145-146页 |
| 附录1.4 IP-LC-MS/MS鉴定到AtPR1的肽段信息 | 第146-147页 |
| 附录1.5 Y2H验证SsCP1与RD21A互作 | 第147-148页 |
| 附录1.6 试剂和培养基 | 第148-152页 |
| 电泳及印迹相关试剂 | 第148-149页 |
| 抗生素贮存液配制 | 第149-150页 |
| MurashigeandSkoogmedium(MS)培养基配制 | 第150-152页 |
| 附录1.7 常规分子生物学技术 | 第152-157页 |
| 附录1.7.1 质粒的小量提取(碱裂解法) | 第152页 |
| 附录1.7.2 质粒DNA的酶切和连接 | 第152-153页 |
| 附录1.7.3 PCR扩增 | 第153-154页 |
| 附录1.7.4 大肠杆菌化学感受态制备和转化 | 第154-155页 |
| 附录1.7.5 农杆菌电穿孔感受态制备及转化 | 第155-157页 |
| 附录2 在读期间研究成果 | 第157-158页 |
| 一、攻读博士期间发表论文 | 第157页 |
| 二、参加会议摘要 | 第157-158页 |
| 致谢 | 第158-160页 |
