| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| ·研究背景 | 第18-24页 |
| ·类风湿性关节炎诊治现状 | 第18-19页 |
| ·辅助性T细胞在类风湿性关节炎发病机制中的作用 | 第19-20页 |
| ·Notch信号途径:T细胞功能调控的新通路 | 第20-24页 |
| ·本研究的目的、内容及技术路线 | 第24-26页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 表达FoxP3的CD4~+CD25~+调节性T细胞检测方法建立 | 第26-31页 |
| ·材料与方法 | 第26-27页 |
| ·外周血标本来源 | 第26页 |
| ·主要试剂:荧光标记的抗体 | 第26页 |
| ·细胞分离及处理 | 第26页 |
| ·细胞表面及胞内染色 | 第26-27页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第27页 |
| ·总RNA抽提及逆转录反应 | 第27页 |
| ·定量PCR检测FoxP3 mRNA表达 | 第27页 |
| ·统计处理 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-28页 |
| ·健康人外周血表达FoxP3的T淋巴细胞检测 | 第27-28页 |
| ·FoxP3主要表达于CD4~+CD25~(high)T细胞 | 第28页 |
| ·T细胞活化后CD4~+CD25~+FoxP3~+T细胞比例增高 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 类风湿性关节炎患者外周血调节性T细胞检测 | 第31-38页 |
| ·材料与方法 | 第31-34页 |
| ·病例选择 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·细胞表面及胞内染色 | 第31-32页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第32页 |
| ·定量PCR检测 | 第32页 |
| ·总RNA抽提及逆转录反应 | 第32页 |
| ·定量PCR检测FoxP3 mRNA表达 | 第32页 |
| ·统计处理 | 第32-34页 |
| ·结果 | 第34-35页 |
| ·流式细胞术检测RA患者外周血CD4~+CD25~+T细胞比例改变 | 第34页 |
| ·流式细胞术检测RA患者外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+比例变化 | 第34-35页 |
| ·定量PCR检测RA患者外周血FoxP3 mRNA表达 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| 第四章 类风湿性关节炎患者外周血Th17细胞检测 | 第38-44页 |
| ·对象与方法 | 第38-39页 |
| ·对象 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·细胞分离及处理 | 第38-39页 |
| ·细胞表面分子及细胞内细胞因子染色 | 第39页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第39页 |
| ·统计处理 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·PHA和PMA+Ion用于Th17细胞检测的结果比较 | 第39-40页 |
| ·类风湿性关节炎患者外周血分泌IL-17的T细胞检测 | 第40-41页 |
| ·类风湿性关节炎患者外周血分泌IFN-γ的T细胞检测 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 类风湿性关节炎患者外周血Treg/Th17比值及其与细胞因子的相关性 | 第44-54页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·病例选择 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·调节性T细胞检测 | 第45页 |
| ·Th17细胞检测 | 第45页 |
| ·定量PCR检测 | 第45-46页 |
| ·总RNA抽提及逆转录反应 | 第45-46页 |
| ·定量PCR检测FoxP3 mRNA表达 | 第46页 |
| ·流式芯片技术检测血清中11种细胞因子 | 第46页 |
| ·统计处理 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·RA患者外周血调节性T细胞检测 | 第46-47页 |
| ·RA患者外周血Th17细胞检测 | 第47页 |
| ·调节性T细胞和Th17细胞转录因子检测 | 第47-48页 |
| ·RA外周血中Th17/Treg比值明显增高 | 第48-49页 |
| ·RA患者外周血中Th1和Th17相关细胞因子明显增多 | 第49-50页 |
| ·Th17/Treg比值与Th1和Th17相关细胞因子水平的相关性分析 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第六章 定量PCR检测类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Notch基因表达 | 第54-60页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·实验对象 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·T、B及单核细胞的磁珠纯化 | 第55页 |
| ·总RNA抽提及逆转录反应 | 第55页 |
| ·定量PCR检测四种Notch受体mRNA表达 | 第55-56页 |
| ·统计学处理 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·定量PCR检测RA外周血T细胞四种Notch受体表达 | 第56-57页 |
| ·定量PCR检测RA外周血B细胞四种Notch受体表达 | 第57页 |
| ·定量PCR检测RA外周血单核细胞四种Notch受体表达 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞Notch及其配体表达 | 第60-68页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·实验对象 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·检测方案 | 第61页 |
| ·细胞表面及胞内染色 | 第61页 |
| ·Western Blot检测T细胞Notch胞内段(NICD)表达 | 第61-63页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-66页 |
| ·活动期RA患者外周血T细胞Notch分子表达 | 第63-64页 |
| ·活动期RA患者外周血B细胞Notch分子表达 | 第64页 |
| ·活动期RA患者外周血单核细胞Notch配体表达 | 第64-65页 |
| ·RA外周血T细胞Notch胞内段(NICD)检测 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第八章 Notch信号调节胶原特异性T细胞增殖与分化 | 第68-76页 |
| ·材料与方法 | 第68-70页 |
| ·小鼠及胶原免疫 | 第68页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第68页 |
| ·小鼠胶原性关节炎模型的制备 | 第68页 |
| ·细胞分离与刺激 | 第68-69页 |
| ·细胞增殖测定 | 第69页 |
| ·流式细胞术检测 | 第69页 |
| ·定量PCR检测4种Notch受体分子及靶基因HES1 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-73页 |
| ·体外胶原特异性Th1和Th17型T细胞增殖分化 | 第70-71页 |
| ·胶原特异的T细胞Notch受体及靶基因HES1 mRNA检测 | 第71-72页 |
| ·阻断Notch信号对胶原特异性T细胞增殖的影响 | 第72页 |
| ·阻断Notch信号对胶原特异性T细胞分化的影响 | 第72-73页 |
| ·Notch配体融合蛋白对胶原特异性T细胞分化的影响 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| 第九章 主要结论与展望 | 第76-78页 |
| ·主要结论 | 第76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 英文缩略词表 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 读博期间发表的研究论文和参加的研究课题 | 第89-90页 |
