| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 莱氏野村菌的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2.2 莱氏野村菌的生物学特性及侵染机制 | 第12-13页 |
| 1.2.3 微菌核的研究进展 | 第13页 |
| 1.2.4 微菌核形成机理 | 第13-14页 |
| 1.3 钙信号途径与真菌细胞生长、发育代谢调控 | 第14-15页 |
| 1.4 钙信号途径参与病原真菌的侵染过程 | 第15-16页 |
| 1.5 NCX与CCI的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5.1 NCX的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5.2 CCI的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.6 研究内容和技术路线 | 第18-19页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第18-19页 |
| 1.7 本研究创新之处 | 第19-20页 |
| 2 钙影响莱氏野村菌微菌核的形成 | 第20-24页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 主要培养基配制方法 | 第20页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-21页 |
| 2.2.1 活化菌种 | 第20-21页 |
| 2.2.2 莱氏野村菌微菌核的诱导培养 | 第21页 |
| 2.2.3 微菌核产量及生物量的测定 | 第21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-24页 |
| 2.3.1 钙离子对莱氏野村菌微菌核形成的影响 | 第21-23页 |
| 2.3.2 钙离子对莱氏野村菌生长的影响 | 第23-24页 |
| 3 NCX和CCI基因的克隆与分析 | 第24-37页 |
| 3.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第24页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 主要设备仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基配制方法 | 第25页 |
| 3.1.5 主要生物学分析软件 | 第25页 |
| 3.2 试验方法 | 第25-31页 |
| 3.2.1 活化菌种 | 第25页 |
| 3.2.2 微菌核的诱导培养 | 第25页 |
| 3.2.3 莱氏野村菌微菌核总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.4 莱氏野村菌NCX与CCI的cDNA一链的获得 | 第26-27页 |
| 3.2.5 NCX与CCI基因cDNA一链的扩增 | 第27-29页 |
| 3.2.6 PCR产物的测序 | 第29-30页 |
| 3.2.7 NCX和CCI基因组序列的克隆 | 第30页 |
| 3.2.8 NCX和CCI的生物信息学及进化关系分析 | 第30-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 3.3.1 NCX与CCI的全长扩增 | 第31-32页 |
| 3.3.2 NCX与CCI的序列分析 | 第32页 |
| 3.3.3 NCX与CCI蛋白生物信息学及进化关系分析 | 第32-37页 |
| 4 NCX和CCI的表达模式分析 | 第37-40页 |
| 4.1 试验材料 | 第37页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 主要设备仪器 | 第37页 |
| 4.1.4 主要培养基配制方法 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 微菌核诱导培养及材料收集 | 第37页 |
| 4.2.2 样品RNA提取及cDNA一链的合成 | 第37页 |
| 4.2.3 qPCR引物设计 | 第37-38页 |
| 4.2.4 莱氏野村菌NCX与CCI的表达模式分析 | 第38-39页 |
| 4.2.5 qPCR结果分析软件 | 第39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-40页 |
| 4.3.1 NCX与CCI的表达模式 | 第39-40页 |
| 5 RNAi法研究NCX与CCI的功能 | 第40-50页 |
| 5.1 试验材料 | 第40页 |
| 5.1.1 试验菌株 | 第40页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 5.1.3 主要设备仪器 | 第40页 |
| 5.1.4 主要培养基和溶液的配制方法 | 第40页 |
| 5.2 试验方法 | 第40-44页 |
| 5.2.1 莱氏野村菌NCX与CCI干扰引物的设计 | 第40-41页 |
| 5.2.2 莱氏野村菌NCX与CCI扩增 | 第41页 |
| 5.2.3 dsRNA的体外合成 | 第41-42页 |
| 5.2.4 dsRNA的纯化 | 第42页 |
| 5.2.5 dsRNA的酶切消化 | 第42-43页 |
| 5.2.6 PEG/Licl法转化siRNA | 第43页 |
| 5.2.7 最适干扰浓度的筛选 | 第43页 |
| 5.2.8 菌落形态和产孢量的测定 | 第43-44页 |
| 5.2.9 生物量和微菌核产量的测定 | 第44页 |
| 5.2.10 毒力生测 | 第44页 |
| 5.2.11 数据分析 | 第44页 |
| 5.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 5.3.1 最适干扰浓度的筛选 | 第44页 |
| 5.3.2 NCX和CCI基因的相互影响 | 第44-45页 |
| 5.3.3 NCX和CCI基因沉默对菌落形态和产孢量的影响 | 第45-47页 |
| 5.3.4 RNA干扰对莱氏野村菌微菌核形态和产量的影响 | 第47-48页 |
| 5.3.5 NCX与CCI干扰对莱氏野村菌毒力的影响 | 第48-50页 |
| 6 讨论 | 第50-52页 |
| 7 主要结论及后续工作 | 第52-53页 |
| 7.1 主要结论 | 第52页 |
| 7.2 后续研究建议 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
