| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第9-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 产前应激 | 第14-15页 |
| 1.1.1 产前应激对子代的影响 | 第14-15页 |
| 1.1.2 产前应激对子代影响的潜在机理 | 第15页 |
| 1.2 心肌肥大的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 糖皮质激素与心肌肥大 | 第16-18页 |
| 1.2.2 线粒体与心肌肥大 | 第18-19页 |
| 1.3 线粒体融合蛋白2(Mfn2)与线粒体动力学 | 第19-20页 |
| 1.4 泛素-蛋白酶体系统与心血管疾病 | 第20-22页 |
| 1.5 泛素-蛋白酶体途径与线粒体蛋白降解 | 第22页 |
| 1.6 研究目的与研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 CORT对H9C2细胞肥大及线粒体结构功能的影响 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 主要药品与试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 H9C2心肌细胞的复苏、培养及传代 | 第27-28页 |
| 2.2.2 鬼笔环肽染色观察H9C2心肌细胞形态 | 第28页 |
| 2.2.3 电镜观察H9C2心肌细胞线粒体形态 | 第28-29页 |
| 2.2.4 Mitored染色观察H9C2心肌细胞线粒体形态 | 第29页 |
| 2.2.5 CORT对H9C2心肌细胞ATP产量的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.6 CORT对H9C2细胞MDA水平的影响 | 第30-32页 |
| 2.2.7 H9C2心肌细胞线粒体的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.8 H9C2细胞线粒体呼吸链复合物酶活性的测定 | 第33页 |
| 2.2.9 H9C2心肌细胞相关肥大基因的测定 | 第33-35页 |
| 2.2.10 统计学分析 | 第35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-39页 |
| 2.3.1 CORT影响H9C2细胞肥大相关基因的mRNA水平 | 第35-36页 |
| 2.3.2 CORT对H9C2细胞骨架的影响 | 第36页 |
| 2.3.3 CORT对心肌细胞ATP含量及MDA水平的影响 | 第36-37页 |
| 2.3.4 CORT对H9C2细胞线粒体呼吸链复合物活性的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.5 电镜下观察CORT对H9C2细胞线粒体形态的影响 | 第38页 |
| 2.3.6 Mitored染色观察CORT对H9C2心肌细胞线粒体形态的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 CORT对心肌细胞线粒体Mfn2泛素化的作用 | 第41-57页 |
| 3.1 材料 | 第41-45页 |
| 3.1.1 主要药品与试剂 | 第41-43页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第43-44页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 蛋白浓度测定 | 第45页 |
| 3.2.2 鸡胚给药 | 第45-46页 |
| 3.2.3 WB检测CORT对H9C2心肌细胞Mfn2及Drp1蛋白表达的影响 | 第46页 |
| 3.2.4 H9C2心肌细胞线粒体及内质网的提取 | 第46-47页 |
| 3.2.5 鸡胚心脏组织线粒体的提取 | 第47页 |
| 3.2.6 WB检测CORT对H9C2心肌细胞及鸡胚心脏中线粒体及内质网中Mfn2蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.7 WB检测CORT对线粒体Mfn2降解速率的影响 | 第48页 |
| 3.2.8 免疫荧光检测过表达Mfn2对H9C2细胞骨架的影响 | 第48-49页 |
| 3.2.9 WB检测H9C2心肌细胞及鸡胚心脏线粒体上Mfn2的泛素化水平变化 | 第49页 |
| 3.2.10 统计学处理 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-54页 |
| 3.3.1 CORT能够增加H9C2细胞及鸡胚心脏中Mfn2全蛋白的表达水平 | 第50页 |
| 3.3.2 CORT作用减少H9C2心肌细胞线粒体Mfn2蛋白表达水平,增加内质网中Mfn2蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.3 CORT作用减少鸡胚心脏线粒体Mfn2蛋白表达水平,增加内质网中Mfn2蛋白的表达 | 第51-52页 |
| 3.3.4 过表达Mfn2后CORT对H9C2细胞骨架的影响 | 第52页 |
| 3.3.5 CORT促进H9C2线粒体Mfn2的降解 | 第52-53页 |
| 3.3.6 CORT作用增加H9C2心肌细胞及鸡胚心脏线粒体中Mfn2泛素化水平 | 第53-54页 |
| 3.3.7 CORT作用对H9C2心肌细胞内质网中Mfn2泛素的影响 | 第54页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 线粒体蛋白Appoptosin在CORT调控Mfn2泛素化中的作用研究 | 第57-71页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.1.2 主要药品与试剂 | 第57-58页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第58-59页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-64页 |
| 4.2.1 NCBI protein数据库筛选与Mfn2相互作用的蛋白 | 第59页 |
| 4.2.2 亚细胞定位预测系统预测蛋白在亚细胞器中的定位 | 第59页 |
| 4.2.3 Q-PCR检测Appoptosin基因表达水平 | 第59-61页 |
| 4.2.4 H9C2心肌细胞线粒体的提取 | 第61页 |
| 4.2.5 H9C2细胞内质网的提取 | 第61页 |
| 4.2.6 WB检测CORT对线粒体及内质网中Appoptosin蛋白表达水平的影响 | 第61页 |
| 4.2.7 免疫共沉淀(CO-IP)检测Appoptosin与Mfn2的结合情况 | 第61-62页 |
| 4.2.8 免疫荧光观察CORT对Appoptosin与Mfn2的共定位的影响 | 第62-63页 |
| 4.2.9 si-Appoptosin质粒转染实验 | 第63页 |
| 4.2.10 CORT对si-Appoptosin转染H9C2细胞后线粒体Mfn2的蛋白表达及泛素化水平的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.11 统计与分析 | 第64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-70页 |
| 4.3.1 NCBIProtein数据库筛选出与Mfn2相互作用的蛋白 | 第64页 |
| 4.3.2 蛋白在亚细胞器上的定位预测结果 | 第64-65页 |
| 4.3.3 CORT增强Appoptosin与Mfn2蛋白之间相互作用 | 第65-66页 |
| 4.3.4 CORT对H9C2细胞中Appoptosin基因及蛋白水平表达的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.5 si-Appoptosin序列的筛选 | 第67页 |
| 4.3.6 si-Appoptosin转染细胞后CORT对线粒体Mfn2表达的影响 | 第67页 |
| 4.3.7 si-Appoptosin转染细胞后CORT对线粒体Mfn2泛素化的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.8 si-Appoptosin转染细胞后CORT对线粒体功能的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.9 si-Appoptosin转染细胞后CORT对肥大相关基因表达的影响 | 第69-70页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第70-71页 |
| 总结与展望 | 第71-74页 |
| 5.1 结论 | 第71-73页 |
| 5.2 创新点 | 第73页 |
| 5.3 研究不足与研究展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 在校期间撰写及发表的论文 | 第82-83页 |
| 附录 英文综述 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
