摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
缩略词表 | 第12-13页 |
引言 | 第13-17页 |
1 材料 | 第17-19页 |
1.1 实验细胞 | 第17页 |
1.2 实验试剂 | 第17-18页 |
1.3 表达载体及质粒 | 第18页 |
1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
2 方法 | 第19-27页 |
2.1 细胞的培养 | 第19页 |
2.2 siRNA干涉 | 第19-20页 |
2.3 质粒在细胞中的过表达 | 第20页 |
2.4 免疫印迹(Western Blot)检测 | 第20-21页 |
2.5 构建稳定亚克隆细胞系 | 第21页 |
2.6 免疫荧光(IF) | 第21-22页 |
2.7 免疫共沉淀(Co-IP) | 第22页 |
2.8 划痕试验 | 第22页 |
2.9 实时荧光定量核酸扩增检测系统(Q-PCR) | 第22-23页 |
2.10 免疫组化 | 第23页 |
2.11 细胞增殖分析 | 第23-24页 |
2.12 细胞周期的同步化法 | 第24-25页 |
2.13 构建Skp2及其突变体真核表达载体 | 第25-26页 |
2.14 细胞集落形成 | 第26页 |
2.15 慢病毒感染 | 第26页 |
2.16 动物实验 | 第26-27页 |
3 结果 | 第27-41页 |
3.1 Erbin丢失促进体内外肿瘤细胞的增殖能力 | 第27-28页 |
3.2 CKI分子p21和p27介导Erbin缺失对细胞的促增殖效应 | 第28-30页 |
3.3 Erbin调控p27特异性E3泛素酶Skp2蛋白稳定性 | 第30-32页 |
3.4 Erbin敲低不影响Skp2核-质定位改变 | 第32-33页 |
3.5 Akt激活不影响HeLa细胞Skp2细胞定位改变 | 第33-34页 |
3.6 Erbin调节Akt活性增强Skp2稳定及功能 | 第34-36页 |
3.7 Skp2调控Erbin表达 | 第36-38页 |
3.8 SCFSkp2在多种细胞中调控Erbin表达 | 第38页 |
3.9 Akt调控Erbin表达 | 第38-40页 |
3.10 Erbin丢失可能是Skp2获得癌基因功能的依赖方式 | 第40-41页 |
4 讨论 | 第41-45页 |
5 结论 | 第45-47页 |
参考文献 | 第47-49页 |
文献综述 | 第49-57页 |
参考文献 | 第54-57页 |
致谢 | 第57-59页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |