| 致谢 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| 1 前言 | 第14-35页 |
| 1.1 昆虫病原真菌在害虫防治中的应用及安全性 | 第14-24页 |
| 1.1.1 生防真菌的杀虫机理及应用 | 第14-15页 |
| 1.1.2 球孢白僵菌的安全性 | 第15-19页 |
| 1.1.3 生防真菌在环境中的持效性及其影响因子 | 第19-21页 |
| 1.1.4 球孢白僵菌的高孢粉生产及制剂技术 | 第21-23页 |
| 1.1.5 球孢白僵菌制剂的田间应用方式方法 | 第23-24页 |
| 1.2 生防真菌工程菌的研究进展及其安全性 | 第24-33页 |
| 1.2.1 生防真菌基因工程技术的研究及应用 | 第24-26页 |
| 1.2.2 Vip3A杀虫蛋白家族的研究进展及安全性 | 第26-29页 |
| 1.2.3 转基因生防真菌制剂的生态安全性评价技术 | 第29-32页 |
| 1.2.4 生防真菌及其基因工程菌的监测和检测技术 | 第32-33页 |
| 1.3 本研究的内容与目标 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-44页 |
| 2.1 高纯度孢子粉及孢子悬乳剂的制备 | 第35页 |
| 2.2 田间试验 | 第35-39页 |
| 2.2.1 试验地位置及气候条件 | 第35-36页 |
| 2.2.2 田间试验设计与处理 | 第36页 |
| 2.2.3 孢子沉降量估计 | 第36-37页 |
| 2.2.4 田间小气候及虫口数据采集 | 第37页 |
| 2.2.5 甘蓝受害级别的评价 | 第37-38页 |
| 2.2.6 田间生物测试 | 第38页 |
| 2.2.7 土壤样品采集与菌群分离培养 | 第38页 |
| 2.2.8 PCR鉴定目标基因及其遗传稳定性 | 第38-39页 |
| 2.3 BbHV8、Bb2860及其田间重分离株的生物学性状比较 | 第39-40页 |
| 2.3.1 菌株与分生孢子制备 | 第39-40页 |
| 2.3.2 生长与产孢特性比较 | 第40页 |
| 2.3.3 分生孢子对UV-B紫外辐射的耐受力测定 | 第40页 |
| 2.3.4 分生孢子的耐热力测定 | 第40页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对分生孢子的定量检测 | 第40-43页 |
| 2.4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 2.4.2 特异性引物 | 第41页 |
| 2.4.3 分生孢子总DNA的提取 | 第41页 |
| 2.4.4 甘蓝叶片上分生孢子DNA的提取 | 第41页 |
| 2.4.5 土壤样品的总DNA提取 | 第41-42页 |
| 2.4.6 qRT-PCR标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| 2.4.7 qRT-PCR对样品的定量检测 | 第43页 |
| 2.4.8 标基因定量检测精确度检验 | 第43页 |
| 2.5 数据分析 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-60页 |
| 3.1 田间试验结果 | 第44-52页 |
| 3.1.1 孢子沉降密度 | 第44页 |
| 3.1.2 各处理主要害虫种群动态 | 第44-47页 |
| 3.1.3 田间气候状况 | 第47页 |
| 3.1.4 甘蓝受害级别 | 第47-48页 |
| 3.1.5 害虫综合防效 | 第48-49页 |
| 3.1.6 主要害虫种群动态、受害级别及相对防效的变异来源分析 | 第49-51页 |
| 3.1.7 两种菌剂对菜青虫的田间毒力 | 第51-52页 |
| 3.2 转基因工程菌剂的生态安全性及环境适应性 | 第52-57页 |
| 3.2.1 非靶标效应 | 第52-53页 |
| 3.2.2 两种菌剂施用后的田间存留动态 | 第53-55页 |
| 3.2.3 土壤分离物中外源靶标基因的稳定性 | 第55页 |
| 3.2.4 生长与产孢性状 | 第55-56页 |
| 3.2.5 分生孢子耐受高温和UV-B辐射的能力 | 第56-57页 |
| 3.3 转基因球孢白僵菌野外残存量的实时荧光定量检测 | 第57-60页 |
| 3.3.1 PCR引物特异性 | 第57-58页 |
| 3.3.2 背景DNA对PCR特异性扩增的影响 | 第58页 |
| 3.3.3 检测精确度分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 5 结语与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| Summary | 第74-77页 |
| 附录：攻读博士学位期间主要成果 | 第78页 |
