| 摘要 | 第7-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 符号说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 文献综述及本论文研究思路 | 第19-28页 |
| 1 文献综述 | 第19-26页 |
| 1.1 脱落酸生物合成途径及NCED基因家族研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2 基因家族不同成员功能验证方法研究进展 | 第23页 |
| 1.3 植物瞬时表达技术的主要方法与应用进展 | 第23-26页 |
| 2 研究思路与方法 | 第26-28页 |
| 2.1 研究目标 | 第26页 |
| 2.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 2.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 烟草TOBRB7启动子的基因合成 | 第28-30页 |
| 1 实验方法 | 第28-29页 |
| 2 实验结果 | 第29页 |
| 3 小结与讨论 | 第29-30页 |
| 3.1 小结 | 第29页 |
| 3.2 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 NCED1、NCED3、NCED4基因的克隆 | 第30-39页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 1.1 植物材料、菌株及质粒 | 第30页 |
| 1.2 试剂 | 第30页 |
| 1.3 仪器及耗材 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-35页 |
| 2.1 实验所需试剂和培养基配制 | 第31页 |
| 2.2 提取甘草DNA | 第31-32页 |
| 2.3 NCED1、NCED3、NCED4基因的PCR扩增反应 | 第32-33页 |
| 2.4 胶回收纯化 | 第33-34页 |
| 2.5 与克隆载体连接 | 第34页 |
| 2.6 转化感受态细胞及阳性克隆筛选 | 第34-35页 |
| 2.7 阳性克隆的筛选及测序 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-38页 |
| 4 小结与讨论 | 第38-39页 |
| 4.1 小结 | 第38页 |
| 4.2 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 甘草根特异性表达载体的构建 | 第39-57页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第39页 |
| 1.1 菌株及质粒 | 第39页 |
| 1.2 试剂 | 第39页 |
| 1.3 仪器与耗材 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-50页 |
| 2.1 载体构建原理 | 第39-40页 |
| 2.2 引物设计 | 第40-41页 |
| 2.3 pCAMBIA1305.1-TobRB7根特异性通用表达载体的构建 | 第41-45页 |
| 2.4 根特异性表达载体pCA-Tob7-NCED1/ NCED3/ NCED4的构建 | 第45-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-55页 |
| 3.1 pCA-TobRB7根特异性通用表达载体的构建结果 | 第50-51页 |
| 3.2 pCA-TobRB7-NCED1/ NCED3/ NCED4根特异性表达载体的构建结果 | 第51-55页 |
| 4 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 4.1 小结 | 第55-56页 |
| 4.2 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 甘草根特异性表达工程菌的构建 | 第57-60页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第57页 |
| 1.1 菌株及质粒 | 第57页 |
| 1.2 试剂 | 第57页 |
| 1.3 仪器与耗材 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-58页 |
| 2.1 根特异性重组质粒的提取 | 第57页 |
| 2.2 根特异性重组质粒电极转化农杆菌 | 第57-58页 |
| 2.3 阳性克隆的筛选及测序 | 第58页 |
| 3 实验结果 | 第58-59页 |
| 4 小结与讨论 | 第59-60页 |
| 4.1 小结 | 第59页 |
| 4.2 讨论 | 第59-60页 |
| 第六章 农杆菌介导的NCEDS基因瞬时过表达体系的建立 | 第60-66页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第60-61页 |
| 1.1 实验材料 | 第60页 |
| 1.2 试剂、仪器、耗材 | 第60-61页 |
| 2 实验所需溶液和培养基配方 | 第61-62页 |
| 3 实验方法 | 第62-63页 |
| 3.1 根癌农杆菌工程菌的活化 | 第62页 |
| 3.2 配制农杆菌菌液重悬液 | 第62页 |
| 3.3 农杆菌对甘草瞬时转化 | 第62-63页 |
| 3.4 GUS染色 | 第63页 |
| 4 实验结果 | 第63-64页 |
| 5 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 5.1 小结 | 第64页 |
| 5.2 讨论 | 第64-66页 |
| 第七章 NCEDS基因瞬时过表达甘草中关键酶基因表达量的测定研究 | 第66-71页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第66页 |
| 1.1 植株材料 | 第66页 |
| 1.2 试剂、仪器与耗材 | 第66页 |
| 2 实验方法 | 第66-69页 |
| 2.1 甘草取样及样品收集 | 第66-67页 |
| 2.2 甘草总RNA提取 | 第67页 |
| 2.3 RNA逆转录 | 第67-68页 |
| 2.4 Real-time PCR检测 | 第68页 |
| 2.5 数据处理 | 第68-69页 |
| 3 实验结果 | 第69-70页 |
| 3.1 工程菌侵染甘草RNA提取结果 | 第69页 |
| 3.2 荧光定量PCR测定甘草酸生物合成途径中关键酶基因的表达量 | 第69-70页 |
| 4 小结与讨论 | 第70-71页 |
| 第八章 NCEDS瞬时过表达对甘草中内源脱落酸含量和甘草酸含量的影响研究 | 第71-79页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第71页 |
| 1.1 植株材料 | 第71页 |
| 1.2 仪器与耗材 | 第71页 |
| 1.3 试剂 | 第71页 |
| 2 实验方法 | 第71-75页 |
| 2.1 甘草样品 | 第71页 |
| 2.2 酶联免疫测定脱落酸(ABA)含量 | 第71-73页 |
| 2.3 HPLC测定甘草酸含量 | 第73-75页 |
| 3 实验结果 | 第75-77页 |
| 3.1 脱落酸含量测定结果 | 第75-76页 |
| 3.2 甘草酸含量测定结果 | 第76-77页 |
| 4 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 4.1 小结 | 第77页 |
| 4.2 讨论 | 第77-79页 |
| 第九章 NCEDS原核表达体系的建立 | 第79-106页 |
| 1 实验材料、试剂及仪器 | 第79-80页 |
| 1.1 菌株 | 第79页 |
| 1.2 试剂 | 第79页 |
| 1.3 仪器与耗材 | 第79-80页 |
| 2 实验方法 | 第80-92页 |
| 2.1 引物设计 | 第80页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第80页 |
| 2.3 NCEDs原核表达载体的构建 | 第80-85页 |
| 2.4 BL21(DE3)菌株重组表达体系的建立 | 第85-86页 |
| 2.5 IPTG诱导表达可溶蛋白 | 第86-88页 |
| 2.6 蛋白纯化及超滤 | 第88-90页 |
| 2.7 NCEDs功能初步验证 | 第90-92页 |
| 3 实验结果 | 第92-103页 |
| 3.1 NCED1、NCED3、NCED4生物信息学分析 | 第92-95页 |
| 3.2 pET-30a(+)-NCED1/NCED3/ NCED4重组质粒构建 | 第95-97页 |
| 3.3 pET30a(+)-NCED1/ NCED3/NCED4重组质粒诱导表达 | 第97-99页 |
| 3.4 重组质粒诱导蛋白的可溶性分析及纯化 | 第99-103页 |
| 3.5 NCEDs功能初步验证结果 | 第103页 |
| 4 小结与讨论 | 第103-106页 |
| 4.1 小结 | 第103-104页 |
| 4.2 讨论 | 第104-106页 |
| 第十章 总结与展望 | 第106-109页 |
| 1 总结 | 第106-108页 |
| 2 展望 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
