| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-40页 |
| 1.1 酵母细胞壁结构及细胞壁蛋白的简介 | 第14-24页 |
| 1.1.1 酵母细胞壁的结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2 酵母细胞壁蛋白的简介 | 第16-24页 |
| 1.2 酵母表面展示技术的研究进展 | 第24-35页 |
| 1.2.1 酵母表面展示技术的简介 | 第24-25页 |
| 1.2.2 酿酒酵母细胞表面展示体系 | 第25-31页 |
| 1.2.3 毕赤酵母细胞表面展示体系 | 第31-34页 |
| 1.2.4 解脂耶氏酵母细胞表面展示体系 | 第34-35页 |
| 1.3 南极假丝酵母脂肪酶 B 及其在毕赤酵母中的表达 | 第35-38页 |
| 1.3.1 CALB 简介 | 第35-37页 |
| 1.3.2 CALB 在毕赤酵母中的表达 | 第37-38页 |
| 1.4 本课题的研究意义及主要研究内容 | 第38-40页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义 | 第38-39页 |
| 1.4.2 本课题的主要研究内容 | 第39-40页 |
| 第二章 毕赤酵母 GPI 型细胞壁蛋白的筛选及确证 | 第40-68页 |
| 2.1 引言 | 第40-41页 |
| 2.2 材料与设备 | 第41-44页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和引物 | 第41页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第41-42页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2.2.4 培养基与溶液 | 第43-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-53页 |
| 2.3.1 毕赤酵母 GPI 型蛋白的预测及相关生物信息学分析 | 第44-46页 |
| 2.3.2 毕赤酵母表面展示载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.3.3 重组毕赤酵母表面展示体系的构建 | 第48-50页 |
| 2.3.4 重组毕赤酵母表面展示蛋白的分析 | 第50-53页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第53-66页 |
| 2.4.1 毕赤酵母 GPI 型蛋白的预测及生物信息学分析 | 第53-57页 |
| 2.4.2 重组毕赤酵母表面展示体系的构建及鉴定 | 第57-59页 |
| 2.4.3 毕赤酵母 GPI 型细胞壁蛋白的确证 | 第59-64页 |
| 2.4.4 毕赤酵母确证的 GPI 型细胞壁蛋白的应用及功能分析 | 第64-66页 |
| 2.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第三章 多个锚定蛋白共表达展示体系的构建及应用 | 第68-92页 |
| 3.1 引言 | 第68-69页 |
| 3.2 材料与设备 | 第69-70页 |
| 3.2.1 菌株、质粒和引物 | 第69页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第69页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第69-70页 |
| 3.2.4 培养基与溶液 | 第70页 |
| 3.3 实验方法 | 第70-77页 |
| 3.3.1 基于 pPICZαA 的单拷贝载体的构建 | 第70-72页 |
| 3.3.2 通过串联表达盒体外构建多拷贝重组质粒 | 第72-73页 |
| 3.3.3 毕赤酵母的电转化及共表达重组菌株的初步筛选 | 第73-75页 |
| 3.3.4 共表达重组菌拷贝数的鉴定 | 第75页 |
| 3.3.5 共表达重组菌脂肪酶 CALB 的诱导表达 | 第75-76页 |
| 3.3.6 共表达重组菌流式细胞术的分析 | 第76页 |
| 3.3.7 共表达重组菌的平板分析 | 第76-77页 |
| 3.3.8 冷冻电子显微镜对细胞壁结构的观察 | 第77页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第77-90页 |
| 3.4.1 基于 pPICZαA 的单拷贝质粒的构建及鉴定 | 第77-79页 |
| 3.4.2 通过串联表达盒体外多拷贝重组质粒的构建及鉴定 | 第79-81页 |
| 3.4.3 共表达重组菌拷贝数的鉴定 | 第81-82页 |
| 3.4.4 共表达重组菌表面展示蛋白的分析及讨论 | 第82-90页 |
| 3.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第四章 毕赤酵母 GPI 型壁蛋白 Gcw14p 功能的初步研究 | 第92-108页 |
| 4.1 引言 | 第92-93页 |
| 4.2 材料与设备 | 第93-94页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和引物 | 第93-94页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第94页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第94页 |
| 4.2.4 培养基与溶液 | 第94页 |
| 4.3 实验方法 | 第94-100页 |
| 4.3.1 GCW 14 基因的敲除 | 第94-96页 |
| 4.3.2 敲除菌株 GS115/ΔGCW14 生长情况的监测 | 第96-97页 |
| 4.3.3 敲除菌株 GS115/ΔGCW14 细胞壁组分的初步检测 | 第97页 |
| 4.3.4 在 GS115/ΔGCW14 中分泌表达 CALB、s7-XYN 和 EGFP | 第97-100页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第100-106页 |
| 4.4.1 GCW 14 生物信息学分析 | 第100页 |
| 4.4.2 GCW 14 基因的敲除及鉴定 | 第100-101页 |
| 4.4.3 GCW 14 对 P. pastoris GS115 生长的影响 | 第101-102页 |
| 4.4.4 敲除菌株 GS115/ΔGCW14 细胞壁组分变化的初步分析结果 | 第102-104页 |
| 4.4.5 在 GS115/ΔGCW14 中分泌表达外源蛋白的结果及分析 | 第104-106页 |
| 4.5 本章小结 | 第106-108页 |
| 结论与展望 | 第108-111页 |
| 结论 | 第108-109页 |
| 本论文创新点 | 第109-110页 |
| 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 附件 | 第126页 |
