| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1.1 前言 | 第9-10页 |
| 1.2 病毒样颗粒 | 第10-18页 |
| 1.2.1 病毒样颗粒的结构和性质 | 第10-11页 |
| 1.2.2 病毒样颗粒的应用 | 第11-15页 |
| 1.2.3 病毒样颗粒的表达和纯化 | 第15-18页 |
| 1.3 内含肽介导的蛋白分离纯化技术 | 第18-21页 |
| 1.3.1 内含肽的结构与分类 | 第18-19页 |
| 1.3.2 内含肽的自剪切机理 | 第19-20页 |
| 1.3.3 影响内含肽自剪切的因素 | 第20页 |
| 1.3.4 内含肽在蛋白分离纯化中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 亲和肽配基的设计及其应用 | 第21-24页 |
| 1.4.1 亲和色谱 | 第21-22页 |
| 1.4.2 亲和肽配基 | 第22页 |
| 1.4.3 亲和肽配基理性设计 | 第22-24页 |
| 1.5 本文的研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 内含肽介导的 MPVVLP 结构蛋白 VP1 的表达和纯化 | 第25-45页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 主要化学试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验设备 | 第27页 |
| 2.2.3 菌种和载体 | 第27-28页 |
| 2.2.4 工具酶及分子量参照物 | 第28页 |
| 2.2.5 引物合成 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-37页 |
| 2.3.1 PCR 扩增内含肽基因 | 第28-31页 |
| 2.3.2 表达质粒 pGEX-4T-1-intein-VP1 的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3 表达质粒 pGEX-4T-1-intein-VP1 的转化及阳性克隆筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.4 融合蛋白 GST-intein-VP1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33-36页 |
| 2.3.5 内含肽自剪切条件优化 | 第36页 |
| 2.3.6 内含肽介导 VP1 在亲和色谱柱内纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.7 VP1 自组装及其 VLP 形态学分析 | 第37页 |
| 2.4 实验结果和讨论 | 第37-44页 |
| 2.4.1 PCR 产物鉴定及双酶切结果 | 第37-38页 |
| 2.4.2 重组质粒阳性克隆鉴定及基因测序 | 第38-40页 |
| 2.4.3 重组菌生长曲线测定 | 第40-41页 |
| 2.4.4 GST-intein-VP1 融合蛋白的表达 | 第41页 |
| 2.4.5 内含肽自剪切条件优化 | 第41-42页 |
| 2.4.6 内含肽介导 VP1 在亲和色谱柱内纯化 | 第42-43页 |
| 2.4.7 纯化后 VP1 的自组装 | 第43-44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 理性设计的 VP1 亲和肽配基纯化效果研究 | 第45-55页 |
| 3.1 前言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料和设备 | 第46-48页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.2 实验设备 | 第47页 |
| 3.2.3 亲和肽配基筛选及制备 | 第47-48页 |
| 3.2.4 菌种和质粒 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.3.1 基于 VP1 的亲和介质制备 | 第48-49页 |
| 3.3.2 静态吸附 | 第49-50页 |
| 3.3.3 VP1 的亲和纯化 | 第50页 |
| 3.3.4 VLP 的自组装 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-54页 |
| 3.4.1 亲和肽介质的制备 | 第51-52页 |
| 3.4.2 亲和肽介质对 VP1 的静态吸附行为 | 第52页 |
| 3.4.3 亲和肽色谱纯化 VP1 | 第52-53页 |
| 3.4.4 VLP 的自组装 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 结论和展望 | 第55-57页 |
| 4.1 结论 | 第55页 |
| 4.2 创新点 | 第55-56页 |
| 4.3 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
