| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-34页 |
| ·细胞因子的研究进展 | 第12-14页 |
| ·白细胞介素18 的研究进展 | 第14-23页 |
| ·IL-18 的分子结构 | 第14-15页 |
| ·IL-18 的处理机制 | 第15-16页 |
| ·IL-18 的受体和信号转导 | 第16页 |
| ·IL-18 的生物学功能 | 第16-21页 |
| ·IL-18 的检测 | 第21-22页 |
| ·IL-18 与变态反应性疾病 | 第22页 |
| ·IL-18 与自身免疫疾病 | 第22-23页 |
| ·IL-18 引起内毒素诱导的肝损伤 | 第23页 |
| ·鸡白细胞介素18 的研究进展 | 第23-25页 |
| ·毕赤酵母的研究进展 | 第25-32页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特性 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母菌株 | 第26页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第26-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的转化方式 | 第27-28页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达机理 | 第28-30页 |
| ·外源蛋白的表达 | 第30-32页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-57页 |
| ·材料 | 第34-40页 |
| ·菌株、载体、引物、病毒及细胞 | 第34页 |
| ·各种酶和试剂 | 第34-36页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第36-39页 |
| ·仪器与设备 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-57页 |
| ·定点突变鸡白介素18 基因 | 第40-41页 |
| ·pPIC9K-mChIL-18 重组真核表达质粒的构建 | 第41-47页 |
| ·线性化 pPIC9K-mChIL-18 重组质粒、GS115 酵母感受态的 制备及电转化 | 第47-49页 |
| ·毕赤酵母转化子表型鉴定 | 第49页 |
| ·多拷贝重组菌株的筛选及PCR 法鉴定重组菌株 | 第49-51页 |
| ·阳性转化子的诱导表达及最佳诱导表达条件的探索 | 第51-52页 |
| ·表达蛋白SDS-PAGE、测定蛋白含量及Western blot 分析 | 第52-55页 |
| ·mChIL-18 蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验 | 第55页 |
| ·m ChIL-18 蛋白及其诱导产生的IFN-γ对VSV 的抑制活性试验 | 第55-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-67页 |
| ·mChIL-18 酵母表达载体的鉴定 | 第57-59页 |
| ·mChIL-18 酵母表达载体的PCR 鉴定 | 第57页 |
| ·mChIL-18 酵母表达载体的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·mChIL-18 酵母表达载体的序列测定 | 第58-59页 |
| ·筛选毕赤酵母转化子的His+/Mut+表型 | 第59页 |
| ·GS115/pPIC9K-mChIL-18 多拷贝重组菌株的筛选鉴定 | 第59-61页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第61-62页 |
| ·Bradford 法测定表达上清中mChIL-18 蛋白含量 | 第62-63页 |
| ·表达产物的Western blot 分析 | 第63-64页 |
| ·mChIL-18 蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验 | 第64-65页 |
| ·mChIL-18 蛋白及其诱导产生的IFN-γ对VSV 的抑制活性试验 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-72页 |
| ·鸡白介素18 成熟蛋白基因的定点突变及重组表达质粒pPIC9K-mChIL-18 的构建 | 第67-68页 |
| ·鸡白介素18 成熟蛋白突变体在毕赤酵母中的高效表达 | 第68-70页 |
| ·鸡白介素18 成熟蛋白的生物活性检测 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第85页 |
