摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
第一章 文献综述 | 第12-22页 |
1.1 草鱼及草鱼出血病 | 第12页 |
1.2 鱼类免疫系统概述 | 第12页 |
1.3 鱼类干扰素抗病毒反应的调节 | 第12-17页 |
1.3.1 鱼类 IFNs 的分类 | 第13-14页 |
1.3.2 鱼类 TLR 信号通路调节 IFN 反应 | 第14-16页 |
1.3.3 鱼类 RLR 信号通路调节 IFN 反应 | 第16-17页 |
1.4 TLRs 信号通路中的接头分子 SARM1 | 第17-21页 |
1.4.1 TLRs 信号通路中的接头分子 | 第17-19页 |
1.4.2 SARM1 分子的功能探索 | 第19-21页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
第二章 草鱼 SARM1 基因与其剪切体的克隆、表达、定位及免疫功能研究 | 第22-52页 |
2.1 前言 | 第22页 |
2.2 材料与方法 | 第22-35页 |
2.2.1 试验材料 | 第22-23页 |
2.2.2 主要试验仪器和试剂 | 第23页 |
2.2.3 总 RNA 提取与 cDNA 的合成 | 第23页 |
2.2.4 CiSARM1 基因第一片段的扩增 | 第23-25页 |
2.2.5 CiSARM1 基因 cDNA 全长的获得 | 第25-28页 |
2.2.6 DNA 的提取 | 第28页 |
2.2.7 CiSARM1 基因组序列全长的获得 | 第28-29页 |
2.2.8 序列的生物信息学分析 | 第29页 |
2.2.9 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的组织表达取样 | 第29-30页 |
2.2.10 实时定量 PCR | 第30-32页 |
2.2.11 实时定量 PCR 检测 GCRV 感染头肾和脾脏中 CiSARM1、CiSARM1s1 和CiSARM1s2 的时序性表达差异 | 第32页 |
2.2.12 实时定量 PCR 检测 GCRV、poly(I:C)、LPS 和 PGN 刺激细胞中 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的时序表达模式 | 第32页 |
2.2.13 EGFP 融合载体和过表达载体的构建 | 第32-33页 |
2.2.14 CiSARM1 和 CiSARM1s 的发夹 RNA(shRNA)的设计与载体构建 | 第33页 |
2.2.15 质粒转染 CIK 细胞以及构建稳定转基因细胞系 | 第33-34页 |
2.2.16 激光共聚焦显微镜观察 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的亚细胞定位 | 第34页 |
2.2.17 实时定量 PCR 检测 GCRV 处理过表达细胞系中基因的时序表达模式 | 第34页 |
2.2.18 实时定量 PCR 检测 GCRV 处理转染干扰载体细胞系中基因的表达变化 | 第34页 |
2.2.19 抗病毒活性试验 | 第34-35页 |
2.3 结果与分析 | 第35-48页 |
2.3.1 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 序列分析 | 第35-38页 |
2.3.2 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 亚细胞定位 | 第38-40页 |
2.3.3 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的组织分布 | 第40-41页 |
2.3.4 GCRV 感染草鱼头肾和脾脏中 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的时序表达 | 第41页 |
2.3.5 GCRV、poly(I:C)、LPS 或者 PGN 处理的细胞中 CiSARM1、CiSARM1s1 和CiSARM1s2 的时序表达模式 | 第41-42页 |
2.3.6 GCRV 处理条件下 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 分别在三种转基因细胞系中的时序表达模式 | 第42-44页 |
2.3.7 GCRV 处理条件下 CiTRIF、CiMyD88、CiIPS-1、CiTRAF6、CiTBK1、CiIRF3、CiIRF7、CiIFN-I 以及 CiMx1 分别在转基因细胞系中的时序表达模式 | 第44-46页 |
2.3.8 GCRV 处理条件下 CiTRIF、CiMyD88、CiIPS-1、CiTRAF6、CiTBK1、CiIRF3、CiIRF7、CiIFN-I 以及 CiMx1 在转染干扰载体细胞系中的表达变化 | 第46-48页 |
2.3.9 CiSARM1、CiSARM1s1 和 CiSARM1s2 的抗病毒活性 | 第48页 |
2.4 讨论 | 第48-52页 |
总结与展望 | 第52-54页 |
参考文献 | 第54-60页 |
附录 | 第60-63页 |
缩略词 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简介 | 第65页 |