| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 综述 | 第10-18页 |
| 2 引言 | 第18-25页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.1.1 帕金森病 | 第18页 |
| 2.2 DJ-1（PARK 7） | 第18-22页 |
| 2.2.1 DJ-1 的结构分布与作用 | 第18-19页 |
| 2.2.2 DJ-1 对于氧化应激的反应和调控多巴胺合成转录 | 第19-20页 |
| 2.2.3 DJ-1 的分子伴侣和蛋白酶活性 | 第20页 |
| 2.2.4 DJ-1 介导的氧化应激的信号通路 | 第20-21页 |
| 2.2.5 DJ-1 在线粒体动态平衡的作用 | 第21-22页 |
| 2.3 线粒体自噬与 mTOR 通路 | 第22-25页 |
| 2.3.1 线粒体自噬 | 第22-23页 |
| 2.3.2 mTOR 通路与自噬相关基因 | 第23-25页 |
| 3 材料和方法 | 第25-41页 |
| 3.1 DJ-1 突变质粒的构建 | 第25-30页 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 | 第25页 |
| 3.1.2 常用试剂及配制 | 第25-27页 |
| 3.1.3 实验步骤 | 第27-30页 |
| 3.2 DJ-1 重组载体的表达与稳定细胞系的建立 | 第30-36页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| 3.2.2 常用试剂及配制 | 第31-32页 |
| 3.2.3 实验步骤 | 第32-36页 |
| 3.3 Real-time PCR 以及免疫荧光标记 | 第36-38页 |
| 3.3.1 实验仪器与设备 | 第36页 |
| 3.3.2 常用试剂及配制 | 第36页 |
| 3.3.3 Real-time PCR 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.4 免疫荧光、细胞活性与凋亡 | 第38-41页 |
| 3.4.1 实验仪器与设备 | 第38页 |
| 3.4.2 常用试剂及配制 | 第38-39页 |
| 3.4.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 4 结果与讨论 | 第41-65页 |
| 4.1 DJ-1 突变载体的构建、鉴定以及稳转细胞系的建立 | 第41-48页 |
| 4.1.1 DJ-1 与 Synuclein 重组质粒构建 | 第41-43页 |
| 4.1.2 Synuclein 稳转细胞系的建立 | 第43-45页 |
| 4.1.3 Real-time PCR | 第45-46页 |
| 4.1.4 β-Syn P123H 与 DJ-1 的免疫荧光共定位 | 第46-48页 |
| 4.2 DJ-1 与线粒体应激 | 第48-52页 |
| 4.2.1 重组型 DJ-1 与线粒体膜蛋白 VDAC-1 的免疫荧光共定位 | 第48-49页 |
| 4.2.2 DJ-1 与 Tom20 的免疫荧光 | 第49-50页 |
| 4.2.3 DJ-1 与 Mito-Tracker 的免疫荧光 | 第50-51页 |
| 4.2.4 P123H 突触核蛋白细胞经过 FCCP 处理后对线粒体的影响 | 第51-52页 |
| 4.3 细胞存活与凋亡研究 | 第52-56页 |
| 4.3.1 细胞的存活实验 | 第52-54页 |
| 4.3.2 LDH 释放检测细胞凋亡实验 | 第54-56页 |
| 4.4 自噬相关的信号转导研究 | 第56-65页 |
| 4.4.1 β-Syn P123H 突触核蛋白细胞溶酶体的病理学研究 | 第56-57页 |
| 4.4.2 自噬相关蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 4.4.3 DJ-1 对于 mTOR 通路影响的研究 | 第59-60页 |
| 4.4.4 β-Syn P123H 与 DJ-1 降解通路的研究 | 第60-62页 |
| 4.4.5 细胞凋亡水平的研究 | 第62-65页 |
| 5 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读学位期间学术成果 | 第76-77页 |
