| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 鸡球虫病及防治 | 第11页 |
| 1.2 蛋白质的糖基化修饰 | 第11-12页 |
| 1.2.1 糖基化修饰的功能 | 第12页 |
| 1.2.2 糖基化修饰的分类 | 第12页 |
| 1.3 N-糖基化修饰 | 第12-15页 |
| 1.3.1 N-糖基化的功能 | 第12-13页 |
| 1.3.2 N-连接聚糖的生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.3 N-糖基化过程中的关键酶GPT | 第14-15页 |
| 1.4 O-糖基化修饰 | 第15-17页 |
| 1.4.1 O-糖基化修饰的功能 | 第15页 |
| 1.4.2 O-糖基化反应过程 | 第15-16页 |
| 1.4.3 ppGalNAc-T家族 | 第16-17页 |
| 1.5 蛋白质糖基化修饰研究现状及主要方法 | 第17-18页 |
| 1.6 蛋白质糖基化修饰在生物中的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.6.1 糖基化修饰在模式生物秀丽隐杆线虫中的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6.2 糖基化修饰在寄生虫中的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.7 研究目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫N-糖基化质谱分析 | 第23-31页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 试剂的配置 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 虫体制备 | 第24页 |
| 2.2.2 N-糖基化质谱检测 | 第24-25页 |
| 2.2.3 数据分析 | 第25-26页 |
| 2.2.4 GeneOntology(GO)功能注释和KEGG通路注释 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 样品蛋白含量测定与SDS-PAGE电泳检测 | 第27-28页 |
| 2.3.2 N糖基化位点鉴定 | 第28页 |
| 2.3.3 N-糖基化蛋白的功能分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫EtppGalNAc-T2和EtGPT的克隆与生物信息学分析 | 第31-49页 |
| 3.1 材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 虫种、菌株和载体 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.4 试剂的配置 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-39页 |
| 3.2.1 E.tenella(广东株)的接种 | 第33页 |
| 3.2.2 E.tenella卵囊、子孢子、第二代裂殖子的收集纯化 | 第33页 |
| 3.2.3 E.tenella不同发育阶段总RNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.4 合成第一链cDNA | 第33-34页 |
| 3.2.5 EtppGalNAc-T2基因的克隆 | 第34-36页 |
| 3.2.6 EtGPT基因克隆 | 第36-38页 |
| 3.2.7 转化克隆菌的菌液鉴定与测序 | 第38页 |
| 3.2.8 EtppGalNAc-T2和EtGPT核苷酸和蛋白质序列分析 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 3.3.1 EtppGalNAc-T2和EtGPT基因的ORF的预测 | 第39-41页 |
| 3.3.2 EtppGalNAc-T2和EtGPTPCR扩增结果 | 第41页 |
| 3.3.3 菌液鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 测序结果 | 第42-44页 |
| 3.3.5 EtppGalNAc-T2和EtGPT序列的初步分析 | 第44-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 EtppGalNAc-T2和EtGPT的原核表达 | 第49-57页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第49页 |
| 4.1.2 限制性内切酶与主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第49页 |
| 4.1.4 试剂配置 | 第49-50页 |
| 4.2 方法 | 第50-54页 |
| 4.2.1 构建pGEX-6p-1-EtppGalNAc-T2和pET-30a-EtGPT原核表达载体 | 第50-53页 |
| 4.2.2 原核表达 | 第53-54页 |
| 4.3 结果 | 第54-56页 |
| 4.3.1 重组表达质粒pGEX-6p-1-EtppGalNAc-T2和pET-30a-EtGPT双酶切鉴定 | 第54页 |
| 4.3.2 EtppGalNAc-T2-GST和EtGPT-His融合表达结果 | 第54-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 E.tenella不同发育阶段EtppGalNAc-T2、EtGPT基因转录的变化 | 第57-65页 |
| 5.1 材料 | 第57页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第57页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第57页 |
| 5.1.3 实时荧光定量PCR模板 | 第57页 |
| 5.2 方法 | 第57-59页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第57-58页 |
| 5.2.2 E.tenella(广东株)不同发育阶段总RNA提取 | 第58页 |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR扩增 | 第58页 |
| 5.2.4 标准曲线的建立 | 第58-59页 |
| 5.2.5 E.tenella不同发育阶段EtGPT和EtppGalNAc-T2表达水平检测 | 第59页 |
| 5.2.6 各阶段EtppGalNAc-T2和EtGPT基因表达相对水平分析 | 第59页 |
| 5.3 结果与分析 | 第59-63页 |
| 5.3.1 E.tenella(广东株)不同发育阶段总RNA | 第59-60页 |
| 5.3.2 E.tenella(广东株)不同发育阶段的普通PCR | 第60页 |
| 5.3.3 内参基因和目的基因的标准曲线、扩增效率和熔解曲线 | 第60-63页 |
| 5.3.4 E.tenella(广东株)各阶段EtppGalNAc-T2、EtGPT基因mRNA水平 | 第63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-65页 |
| 全文结论 | 第65-66页 |
| 创新点 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 导师简介 | 第78-79页 |
