| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-22页 |
| 1 试验材料 | 第13-15页 |
| 1.1 实验动物 | 第13页 |
| 1.2 载体及主要试剂 | 第13页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第13-14页 |
| 1.4 试验所需溶液及其配制 | 第14-15页 |
| 2 试验方法 | 第15-22页 |
| 2.1 设计与合成引物 | 第15页 |
| 2.2 PCR扩增鹅VP3基因 | 第15-16页 |
| 2.3 VP3基因纯化回收 | 第16页 |
| 2.4 VP3基因的TA克隆 | 第16页 |
| 2.5 转化 | 第16页 |
| 2.6 提取克隆质粒 | 第16-17页 |
| 2.7 克隆质粒的鉴定 | 第17页 |
| 2.8 构建并鉴定pET-30a-VP3表达质粒 | 第17-18页 |
| 2.9 表达质粒的诱导及表达形式鉴定 | 第18页 |
| 2.10 重组蛋白纯化 | 第18页 |
| 2.11 多克隆抗体制备 | 第18页 |
| 2.12 多克隆抗体的鉴定 | 第18-19页 |
| 2.13 多克隆抗体效价检测 | 第19页 |
| 2.14 QBI-HEK-293细胞的复苏 | 第19页 |
| 2.15 Ad5扩大培养 | 第19页 |
| 2.16 引物的设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.17 重组腺病毒穿梭质粒pCR259-VP3的构建 | 第20页 |
| 2.18 重组腺病毒质粒High-VP3的构建 | 第20页 |
| 2.19 重组腺病毒rAd-VP3的制备 | 第20页 |
| 2.20 rAd-VP3的Rt-PCR鉴定 | 第20-21页 |
| 2.21 IFAT检测VP3基因在rAd-VP3中的表达 | 第21页 |
| 2.22 Western-blot分析 | 第21页 |
| 2.23 重组腺病毒rAd-VP3 TCID_(50)的测定 | 第21-22页 |
| 结果 | 第22-30页 |
| 3.1 鹅细小病毒VP3基因的PCR扩增及克隆质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2 鉴定表达质粒pET-30a-VP3 | 第23页 |
| 3.3 重组质粒诱导表达 | 第23-24页 |
| 3.4 重组蛋白存在形式鉴定 | 第24页 |
| 3.5 重组蛋白纯化 | 第24-25页 |
| 3.6 重组蛋白Western-blot分析 | 第25页 |
| 3.7 多克隆抗体效价测定 | 第25页 |
| 3.8 重组腺病毒穿梭质粒pCR259-VP3的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.9 重组腺病毒质粒High-VP3的鉴定 | 第26-27页 |
| 3.10 重组腺病毒rAd-VP3的制备 | 第27页 |
| 3.11 rAd-VP3的Rt-PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 3.12 IFAT检测VP3基因在rAd-VP3中的表达 | 第28页 |
| 3.13 Western-blot分析 | 第28-29页 |
| 3.14 重组腺病毒rAd-VP3病毒滴度测定 | 第29-30页 |
| 讨论 | 第30-32页 |
| 结论 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 作者简介 | 第37页 |
