| 第一部分 用基因拷贝数直接定量快速诊断缺失型α-地贫 | 第6-100页 |
| 中文摘要 | 第6-12页 |
| 英文摘要 | 第12-20页 |
| 引言 | 第20-27页 |
| 实验材料 | 第27-34页 |
| 1. 试剂耗材 | 第27-30页 |
| 2. 主要仪器 | 第30-31页 |
| 3. 分子生物学应用软件 | 第31页 |
| 4. 网络与生物学数据库 | 第31页 |
| 5. 缺失型α-地贫诊断参考方法、常规方法、对比检测方法 | 第31-32页 |
| 6. 样品来源 | 第32-34页 |
| 实验方法 | 第34-58页 |
| 1. 本研究基本技术路线 | 第34页 |
| 2. 缺失型α-地贫Southern Blot检测体系的建立 | 第34-40页 |
| 3. 定量检测模式选择 | 第40-42页 |
| 4. 拷贝数定量目的基因与参比基因的选择 | 第42-44页 |
| 5. 目的和参比基因及其代表性DNA序列选择 | 第44-46页 |
| 6. 相对定量PCR检测体系及扩增条件设计 | 第46-48页 |
| 7. 四重TaqMan荧光定量PCR体系引物及探针设计 | 第48-50页 |
| 8. 引物扩增特异性验证 | 第50页 |
| 9. 四重TaqMan实时定量PCR体系优化及扩增效率分析 | 第50-54页 |
| 10. 四重TaqMan荧光定量PCR体系重复性与稳定性评价 | 第54页 |
| 11. 相对定量检测及数据分析方法 | 第54-55页 |
| 12. 诊断方法灵敏度与准确性初步评价 | 第55-56页 |
| 13. 方法学灵敏度与准确性扩展评价 | 第56页 |
| 14. 盲法样本检测方法学灵敏度与准确性评价 | 第56-57页 |
| 15. 小规模人群筛查检测评价 | 第57页 |
| 16. 数据分析方式及统计方法 | 第57-58页 |
| 实验结果 | 第58-79页 |
| 1. 缺失型α-地贫Southern Blot检测体系的建立 | 第58-61页 |
| 2. 四重TaqMan实时定量PCR体系引物扩增特异性验证结果 | 第61-63页 |
| 3. 四重TaqMan实时定量PCR体系优化 | 第63-66页 |
| 4. 四重TaqMan实时定量PCR优化体系扩增效率评价及体系确定 | 第66-68页 |
| 5. 四重TaqMan实时定量PCR优化体系批内及批间精密度评价 | 第68-69页 |
| 6. 诊断方法灵敏度与准确性初步观察 | 第69-70页 |
| 7. 方法学灵敏度与准确性扩展评价 | 第70-72页 |
| 8. 大样本盲法分析评价 | 第72-77页 |
| 9. 小规模人群筛查检测评价 | 第77-79页 |
| 讨论 | 第79-95页 |
| 1. 缺失型α-地贫分子机制及目前采用的诊断途径和诊断方法 | 第79-80页 |
| 2. 缺失型α-地贫分子诊断方法学研究现状及本研究出发点与设想 | 第80-81页 |
| 3. 缺失型α-地贫Southern Blot体系建立的重要性与关键问题 | 第81-84页 |
| 4. 目的基因拷贝数定量模式的选择 | 第84-85页 |
| 5. 目的基因和参比基因PCR扩增代表性DNA目的序列选择 | 第85-87页 |
| 6. 相对定量PCR检测体系及反应条件设计 | 第87-88页 |
| 7. 四重TaqMan实时定量PCR体系优化 | 第88-90页 |
| 8. 新方法用于缺失型α-地贫分子诊断的灵敏度与准确性初步评价 | 第90-92页 |
| 9. 大样本盲法分析评价 | 第92-93页 |
| 10. 小规模人群筛查评价 | 第93-94页 |
| 11. 结论与展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 第二部分 人ξ珠蛋白ELISA定量检测方法的建立与应用 | 第100-141页 |
| 中文摘要 | 第100-104页 |
| 英文摘要 | 第104-109页 |
| 引言 | 第109-111页 |
| 实验材料 | 第111-114页 |
| 1. 试剂耗材 | 第111-112页 |
| 2. 主要仪器设备 | 第112-113页 |
| 3. 标本来源 | 第113-114页 |
| 实验方法 | 第114-121页 |
| 1. 本研究基本技术路线 | 第114页 |
| 2. 人ζ珠蛋白双抗体夹心法(ELISA)定性检测体系的建立 | 第114-115页 |
| 3. 人天然ζ珠蛋白的分离、纯化和鉴定 | 第115-117页 |
| 4. 人ζ珠蛋白ELISA定量检测体系的建立 | 第117-119页 |
| 5. 样本中ζ珠蛋白定量检测 | 第119-120页 |
| 6. 数据分析方式及统计方法 | 第120-121页 |
| 实验结果 | 第121-133页 |
| 1. 天然ζ珠蛋白亲和层析分离、纯化和鉴定 | 第121-122页 |
| 2. 分子筛纯化天然ζ珠蛋白及SDS-PAGE、Western Blot、ELISA、HPLC鉴定 | 第122-123页 |
| 3. 分子筛纯化天然ζ珠蛋白单体的浓度确定 | 第123-125页 |
| 4. 人ζ蛋白ELISA定量检测检出限(检测有效范围/灵敏度)确定 | 第125-126页 |
| 5. 人ζ珠蛋白ELISA定量检测体系专一性(特异性)评价 | 第126页 |
| 6. 定量检测体系的天然ζ珠蛋白标准品定值 | 第126页 |
| 7. 定量检测体系的稳定性及ζ珠蛋白保存稳定性 | 第126-128页 |
| 8. ζ珠蛋白二聚体对定量检测结果的影响分析结果 | 第128-129页 |
| 9. 样本检测 | 第129-131页 |
| 10. 正常人发育过程中ζ珠蛋白表达规律的总结分析 | 第131-133页 |
| 讨论 | 第133-138页 |
| 1. ζ珠蛋白ELISA定量检测体系建立的基本设计方案与出发点 | 第133页 |
| 2. ζ珠蛋白ELISA定量检测体系中标准品制备相关问题 | 第133-135页 |
| 3. ELISA定量检测体系的检测限确定 | 第135页 |
| 4. ELISA定量检测体系的回收率分析 | 第135-136页 |
| 5. ELISA定量检测标准品贮存稳定性、样本贮存稳定性、检测重复性评价 | 第136页 |
| 6. 样本检测结果分析 | 第136-137页 |
| 7. 通过样本检测结果所获得的重要信息及下一步工作展望 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-141页 |
| 英文缩略词表 | 第141-143页 |
| 攻读博士学位期间(2007.9-2011.6)成果 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 统计学证明 | 第146-147页 |
