| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 转基因小鼠的研究情况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 小鼠是研究人类疾病的模型动物 | 第13页 |
| 1.1.2 建立转基因小鼠的常用方法及相关技术简介 | 第13-16页 |
| 1.2 Cre/loxP系统及其应用简介 | 第16-20页 |
| 1.2.1 Cre/loxP系统简介 | 第16-18页 |
| 1.2.2 Cre/loxP系统在小鼠遗传学中的应用 | 第18-20页 |
| 1.3 Cre重组酶转基因小鼠的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 Stella基因的研究情况 | 第22-23页 |
| 1.5 重组工程技术 | 第23-25页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1 材料试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 质粒与菌种 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.5 主要溶液的配置 | 第26-27页 |
| 2.1.6 引物序列 | 第27-28页 |
| 2.2 基因打靶载体的构建方法 | 第28-37页 |
| 2.2.1 PCR扩增同源重组臂序列 | 第30-31页 |
| 2.2.2 构建Stella找回载体、Cre敲入载体 | 第31-35页 |
| 2.2.3 利用基因重组构建基因打靶载体 | 第35-37页 |
| 2.2.4 质粒DNA的大剂量提取 | 第37页 |
| 2.3 小鼠胚胎干细胞基因打靶与显微注射 | 第37-40页 |
| 2.3.1 小鼠ES细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.3.2 ES细胞传代 | 第38页 |
| 2.3.3 ES细胞的冻存及解冻 | 第38页 |
| 2.3.4 ES细胞的电转化 | 第38-39页 |
| 2.3.5 ES细胞克隆的挑取 | 第39页 |
| 2.3.6 ES细胞DNA提取 | 第39-40页 |
| 2.3.7 ES细胞正确基因打靶的鉴定 | 第40页 |
| 2.3.8 ES细胞的显微注射 | 第40页 |
| 2.4 Stella-Cre转基因小鼠的获得与鉴定 | 第40-42页 |
| 2.4.1 Stella-Cre转基因小鼠的获得 | 第40-42页 |
| 2.4.2 小鼠尾尖基因组DNA的制备 | 第42页 |
| 2.4.3 Stella-Cre转基因小鼠的PCR鉴定 | 第42页 |
| 2.5 Stella-Cre转基因小鼠体内Cre重组酶活性检测 | 第42-45页 |
| 2.5.1 Stella-Cre转基因小鼠杂交后代胚胎基因型鉴定 | 第42页 |
| 2.5.2 Cre重组酶介导删除效率的PCR检测 | 第42-43页 |
| 2.5.3 胚胎染色及石蜡切片 | 第43-44页 |
| 2.5.4 骨髓细胞lacZ表达情况的检测 | 第44-45页 |
| 第3章 实验结果 | 第45-56页 |
| 3.1 Stella找回载体和Cre敲入载体的构建及鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2 Stella-Cre基因打靶载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3 小鼠ES细胞基因打靶及其鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4 转基因小鼠的鉴定 | 第48-51页 |
| 3.4.1 F1代嵌合体小鼠的获得 | 第48-49页 |
| 3.4.2 Stella-Cre转基因小鼠PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.4.3 Stella-Cre转基因小鼠杂交后代胚胎基因型鉴定 | 第50-51页 |
| 3.5 Cre重组酶体内活性检测 | 第51-56页 |
| 3.5.1 胚胎体内Cre重组酶介导的基因删除情况PCR检测 | 第51-52页 |
| 3.5.2 Stella-Cre转基因小鼠与R26R报告小鼠后代胚胎染色及切片 | 第52-54页 |
| 3.5.3 骨髓细胞lacZ活性检测 | 第54-56页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第56-61页 |
| 4.1 关于利用重组工程构建基因打靶载体方法的讨论 | 第56页 |
| 4.2 关于通过ES细胞基因打靶途径建立转基因小鼠方法的讨论 | 第56-57页 |
| 4.3 关于Cre重组酶表达载体对Stella基因功能的影响 | 第57页 |
| 4.4 关于Stella-Cre转基因小鼠删除效率的讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 关于Stella-Cre转基因小鼠的优势 | 第58-59页 |
| 4.6 关于Stella-Cre转基因小鼠应用范围的讨论 | 第59页 |
| 4.7 结论 | 第59页 |
| 4.8 本研究的特色之处 | 第59-60页 |
| 4.9 本试验的有待于改进和深入研究之处 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录: 在读期间所发表的论文及获得成果 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
