| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-20页 |
| 1.1 木聚糖酶研究 | 第9-13页 |
| 1.1.1 木聚糖 | 第9页 |
| 1.1.2 木聚糖酶概述 | 第9-10页 |
| 1.1.3 木聚糖酶理化性质 | 第10页 |
| 1.1.4 木聚糖酶的分类 | 第10页 |
| 1.1.5 木聚糖酶结构 | 第10-11页 |
| 1.1.6 木聚糖酶的应用 | 第11-13页 |
| 1.1.6.1 木聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.6.2 木聚糖酶在造纸和制浆中的应用 | 第12页 |
| 1.1.6.3 木聚糖酶在食品工业中的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.6.4 木聚糖酶的其它应用 | 第13页 |
| 1.2 木聚糖酶抑制蛋白 | 第13-16页 |
| 1.2.1 木聚糖酶抑制蛋白概述 | 第13页 |
| 1.2.2 木聚糖酶抑制蛋白分布 | 第13-14页 |
| 1.2.3 木聚糖酶抑制蛋白性质 | 第14-15页 |
| 1.2.3.1 基本性质 | 第14页 |
| 1.2.3.2 抑制特性 | 第14-15页 |
| 1.2.4 木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶的抑制机理 | 第15-16页 |
| 1.3 木聚糖酶抑制蛋白对谷物抵御病原菌中的意义 | 第16-17页 |
| 1.4 木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶应用领域的影响 | 第17-20页 |
| 1.4.1 面包焙烤 | 第17-18页 |
| 1.4.2 谷朊粉-淀粉分离 | 第18页 |
| 1.4.3 动物饲料 | 第18页 |
| 1.4.4 啤酒生产 | 第18页 |
| 1.4.5 生物化学工具 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-32页 |
| 3.1 材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 谷物 | 第21页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第21页 |
| 3.1.3 试剂与药品 | 第21页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第21页 |
| 3.1.5 培养基 | 第21-22页 |
| 3.2 有关试验的操作流程 | 第22-24页 |
| 3.2.1 谷物籽粒中粗蛋白提取 | 第22页 |
| 3.2.2 小麦木聚糖酶抑制蛋白taxi-Ⅰ基因的克隆 | 第22-23页 |
| 3.2.3 小麦木聚糖酶抑制蛋白基因在大肠杆菌中的表达 | 第23-24页 |
| 3.2.4 小麦木聚糖酶抑制蛋白基因在毕赤酵母中的表达 | 第24页 |
| 3.3 试验方法 | 第24-32页 |
| 3.3.1 谷物籽粒中粗蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 3.3.2 谷物不同部位粗蛋白的提取 | 第25页 |
| 3.3.3 谷物籽粒及其不同部位木聚糖酶活性的测定 | 第25页 |
| 3.3.4 重组酵母木聚糖酶的制备 | 第25页 |
| 3.3.5 谷物籽粒中木聚糖酶抑制活性的测定 | 第25-26页 |
| 3.3.6 总RNA 的提取 | 第26页 |
| 3.3.7 RT-PCR | 第26-28页 |
| 3.3.8 重组载体的构建 | 第28页 |
| 3.3.9 制备和转化感受态大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 3.3.10 阳性转化子的筛选 | 第29页 |
| 3.3.11 目的基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第29页 |
| 3.3.12 表达产物的纯化 | 第29-30页 |
| 3.3.13 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第30页 |
| 3.3.14 毕赤酵母细胞的电击转化 | 第30页 |
| 3.3.15 G418 压力筛选高拷贝转化子 | 第30-31页 |
| 3.3.16 目的基因在毕赤酵母中的表达检测 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-42页 |
| 4.1 不同谷物籽粒木聚糖酶及木聚糖酶抑制蛋白的分布特征 | 第32-34页 |
| 4.1.1 不同谷物的木聚糖酶及木聚糖酶抑制蛋白活性 | 第32-33页 |
| 4.1.2 小麦、黑麦和绿粒小麦不同部位的木聚糖酶及木聚糖酶抑制蛋白活性 | 第33-34页 |
| 4.2 小麦木聚糖酶抑制蛋白基因的克隆 | 第34-38页 |
| 4.2.1 小麦幼胚总RNA | 第34页 |
| 4.2.2 RT-PCR 扩增taxi-Ⅰ基因 | 第34-35页 |
| 4.2.3 taxi-Ⅰ基因的TA 克隆及序列分析 | 第35-38页 |
| 4.3 木聚糖酶抑制蛋白基因的原核表达 | 第38-39页 |
| 4.3.1 pET30a- taxi-Ⅰ重组载体的构建 | 第38页 |
| 4.3.2 pET-30a- taxi-Ⅰ表达产物检测结果 | 第38-39页 |
| 4.4 木聚糖酶抑制蛋白基因的真核表达 | 第39-42页 |
| 4.4.1 pMD19-taxi-Ⅰ重组载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.4.2 pPIC9K-taxi-Ⅰ重组载体的构建 | 第40页 |
| 4.4.3 pPIC9K-taxi-Ⅰ转化毕赤酵母GS115 | 第40-42页 |
| 5 结论与讨论 | 第42-45页 |
| 5.1 结论 | 第42页 |
| 5.2 讨论 | 第42-44页 |
| 5.2.1 不同谷物籽粒木聚糖酶及木聚糖酶抑制蛋白分布情况与已报道的差异 | 第42-43页 |
| 5.2.2 taxi-Ⅰ基因在原核中未见表达的原因 | 第43页 |
| 5.2.3 taxi-Ⅰ基因在毕赤酵母中表达量低的原因 | 第43-44页 |
| 5.3 前景展望 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| ABSTRACT | 第51页 |
