| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第11-39页 |
| 1.1 蛋白质构象研究概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 蛋白质的结构 | 第11-13页 |
| 1.1.2 蛋白质的二级结构 | 第13-14页 |
| 1.2 蛋白质二级结构的预测 | 第14-15页 |
| 1.3 蛋白质二级结构测试技术 | 第15-31页 |
| 1.3.1 核磁共振波谱法 | 第16-19页 |
| 1.3.1.1 核磁共振波谱法概述 | 第16页 |
| 1.3.1.2 NMR研究蛋白二级结构 | 第16-19页 |
| 1.3.2 圆二色谱 | 第19-23页 |
| 1.3.2.1 圆二色谱概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 蛋白质的圆二色性 | 第20-21页 |
| 1.3.2.3 CD数据拟合计算蛋白质二级结构 | 第21-23页 |
| 1.3.3 傅里叶红外光谱 | 第23-31页 |
| 1.3.3.1 红外光谱概述 | 第23-24页 |
| 1.3.3.2 蛋白质红外光谱 | 第24-25页 |
| 1.3.3.3 傅里叶红外光谱简介 | 第25-27页 |
| 1.3.3.4 傅里叶红外光谱用于蛋白二级结构分析 | 第27-29页 |
| 1.3.3.5 FTIR分析蛋白质构象变化 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-39页 |
| 第二章 水溶液中蛋白质二级结构红外分析方法建立 | 第39-61页 |
| 2.1 引言 | 第39-41页 |
| 2.2 傅里叶红外数据分析方法 | 第41-42页 |
| 2.3 傅里叶红外光谱分析水溶液中蛋白二级结构 | 第42-59页 |
| 2.3.1 实验方法建立 | 第42-51页 |
| 2.3.1.1 实验仪器 | 第42-44页 |
| 2.3.1.2 实验条件 | 第44-45页 |
| 2.3.1.3 制样 | 第45页 |
| 2.3.1.4 实验方法及操作 | 第45-47页 |
| 2.3.1.5 数据处理 | 第47-51页 |
| 2.3.2 应用 | 第51-59页 |
| 2.3.2.1 可溶性鸟苷酸环化酶血红素结构域蛋白的二级结构研究 | 第51-55页 |
| 2.3.2.2 与圆二色谱法对比 | 第55-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 第三章 环磷酸腺苷受体蛋白的结晶 | 第61-94页 |
| 3.1 CRP蛋白研究概况 | 第61-74页 |
| 3.1.1 CRP概述 | 第62页 |
| 3.1.2 CRP与cAMP的相互作用 | 第62-64页 |
| 3.1.3 CRP中的对称性 | 第64-65页 |
| 3.1.4 CRP与启动子的相互作用 | 第65-67页 |
| 3.1.5 CRP与RNA聚合酶的相互作用 | 第67-69页 |
| 3.1.6 CRP结合cAMP前后二级结构比较 | 第69-70页 |
| 3.1.7 cAMP诱导的CRP构象变化 | 第70-74页 |
| 3.1.8 CRP研究中待解决的问题 | 第74页 |
| 3.2 本研究的目的及意义 | 第74-75页 |
| 3.3 CRP变体蛋白的表达、纯化 | 第75-80页 |
| 3.3.1 试剂和仪器 | 第75-76页 |
| 3.3.1.1 质粒、菌种 | 第75页 |
| 3.3.1.2 实验试剂 | 第75-76页 |
| 3.3.1.3 实验仪器 | 第76页 |
| 3.3.2 实验方法 | 第76-77页 |
| 3.3.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第76页 |
| 3.3.2.2 CRP~*蛋白质粒的转化 | 第76页 |
| 3.3.2.3 CRP~*蛋白的预表达 | 第76-77页 |
| 3.3.2.4 CRP~*蛋白的大量表达 | 第77页 |
| 3.3.3 CRP蛋白的纯化 | 第77-78页 |
| 3.3.3.1 Bio-Rex70层析 | 第77-78页 |
| 3.3.3.2 hydroxyapatite离子交换 | 第78页 |
| 3.3.3.3 Phenyl Sepharose层析 | 第78页 |
| 3.3.4 apo-CRP及CRP~*蛋白的结晶 | 第78-80页 |
| 3.3.4.1 蛋白的浓缩 | 第78-79页 |
| 3.3.4.2 apo-CRP蛋白的结晶及生长条件的优化 | 第79页 |
| 3.3.4.3 L148R CRP蛋白晶体生长条件的筛选 | 第79页 |
| 3.3.4.4 L148R CRP晶体生长条件的优化 | 第79-80页 |
| 3.4 实验结果 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 第四章 CRP中loop3和loop4的功能研究 | 第94-109页 |
| 4.1 引言 | 第94-97页 |
| 4.1.1 loop3和loop4功能研究现状 | 第94-96页 |
| 4.1.2 等温滴定量热法 | 第96-97页 |
| 4.2 试剂和仪器 | 第97页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第97页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第97页 |
| 4.3 实验方法 | 第97-99页 |
| 4.3.1 α-CRP蛋白样品的准备 | 第97页 |
| 4.3.2 α-CRP蛋白的圆二色谱 | 第97页 |
| 4.3.3 α-CRP蛋白的MALDI-TOF质谱 | 第97-98页 |
| 4.3.4 α-CRP蛋白的ANS荧光淬灭 | 第98页 |
| 4.3.5 CRP变体蛋白的等温量热实验 | 第98-99页 |
| 4.4 实验结果 | 第99-105页 |
| 4.4.1 CRP变体蛋白的二级结构比较 | 第99-100页 |
| 4.4.2 α-CRP蛋白的MALDI-TOF质谱 | 第100-101页 |
| 4.4.3 α-CRP蛋白的ANS荧光淬灭 | 第101-103页 |
| 4.4.4 α-CRP蛋白的ITC | 第103-105页 |
| 4.5 讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-109页 |
| 论文发表情况 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
