| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| Table of Contents | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-40页 |
| 1.1 组蛋白修饰 | 第16-17页 |
| 1.2 组蛋白乙酰基转移酶 | 第17-24页 |
| 1.2.1 组蛋白乙酰转移酶的分类 | 第17-19页 |
| 1.2.2 p300/CBP | 第19-21页 |
| 1.2.3 PCAF | 第21-23页 |
| 1.2.4 Gcn5 | 第23-24页 |
| 1.3 核小体乙酰化酶复合物 | 第24-26页 |
| 1.3.1 SAGA复合物 | 第24-26页 |
| 1.3.2 PCAF复合物 | 第26页 |
| 1.4 组蛋白乙酰转移酶功能的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.4.1 组蛋白乙酰转移酶与基因转录调控 | 第26-27页 |
| 1.4.2 组蛋白乙酰转移酶与细胞周期 | 第27-29页 |
| 1.4.3 组蛋白乙酰转移酶与疾病 | 第29-32页 |
| 1.4.3.1 组蛋白乙酰转移酶与癌症 | 第29-31页 |
| 1.4.3.2 组蛋白乙酚转移酶与神经系统疾病 | 第31-32页 |
| 1.4.3.3 组蛋白乙酰转移酶与病毒感染 | 第32页 |
| 1.5 腺病毒E1A的研究进展 | 第32-39页 |
| 1.5.1 E1A的结构及生物学特性 | 第33-34页 |
| 1.5.2 E1A与p300/CBP、PCAF的关系 | 第34-36页 |
| 1.5.3 E1A的生物学功能 | 第36-39页 |
| 1.5.3.1 E1A与细胞周期的关系 | 第36-37页 |
| 1.5.3.2 E1A与免疫系统的关系 | 第37页 |
| 1.5.3.3 E1A与细胞癌变的关系 | 第37-39页 |
| 1.6 本文的研究内容及意义 | 第39-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-74页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第40-47页 |
| 2.1.1 基因 | 第40页 |
| 2.1.2 质粒、菌株 | 第40-43页 |
| 2.1.3 工具酶和抗体 | 第43-44页 |
| 2.1.4 人工合成多肽 | 第44页 |
| 2.1.5 试剂 | 第44-46页 |
| 2.1.6 实验主要仪器 | 第46-47页 |
| 2.2 方法 | 第47-74页 |
| 2.2.1 大肠杆菌(E.coli)感受态细胞的制备和DNA转化 | 第47-48页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 2.2.1.2 质粒转化感受态细胞 | 第48页 |
| 2.2.2 质粒DNA的提取 | 第48-49页 |
| 2.2.3 质粒DNA的工具酶处理 | 第49-50页 |
| 2.2.3.1 DNA的限制性内切酶消化 | 第49-50页 |
| 2.2.3.2 线性DNA 5’端磷酸基团的去除 | 第50页 |
| 2.2.3.3 粘性末端连接 | 第50页 |
| 2.2.4 DNA的纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.4.1 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳 | 第50-51页 |
| 2.2.4.2 DNA片段回收 | 第51页 |
| 2.2.5 PCR相关实验 | 第51-55页 |
| 2.2.5.1 PCR反应 | 第51-54页 |
| 2.2.5.2 PCR产物的克隆 | 第54页 |
| 2.2.5.3 定点突变 | 第54-55页 |
| 2.2.5.3.1 定点突变引物 | 第54-55页 |
| 2.2.5.3.2 定点突变流程 | 第55页 |
| 2.2.6 重组融合蛋白的表达 | 第55-57页 |
| 2.2.7 蛋白的分离纯化 | 第57-62页 |
| 2.2.7.1 蛋白质的分离纯化方法及其原理 | 第57-59页 |
| 2.2.7.2 菌体细胞超声破碎 | 第59-60页 |
| 2.2.7.3 亲和层析 | 第60-61页 |
| 2.2.7.4 阳离子交换层析 | 第61-62页 |
| 2.2.7.5 凝胶过滤层析 | 第62页 |
| 2.2.8 hPCAF(493-658)蛋白突变体的表达质粒构建、表达和纯化 | 第62-63页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE电泳 | 第63-65页 |
| 2.2.9.1 分离胶及浓缩胶的制备 | 第63-64页 |
| 2.2.9.2 SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色 | 第64-65页 |
| 2.2.10 Western blot检测体外乙酰化反应 | 第65-66页 |
| 2.2.11 组蛋白乙酰转移酶活性测定 | 第66-67页 |
| 2.2.12 化学交联反应 | 第67-68页 |
| 2.2.13 动态光散射实验 | 第68-69页 |
| 2.2.14 静态激光光散射实验 | 第69-70页 |
| 2.2.15 pull-down实验 | 第70-71页 |
| 2.2.16 蛋白质晶体生长 | 第71-74页 |
| 第三章 结果与分析 | 第74-117页 |
| 3.1 人PCAF组蛋白乙酰转移酶活性区域(HAT)的同源二聚体结构研究 | 第74-96页 |
| 3.1.1 PCAF(493-658)融合蛋白表达质粒的构建 | 第74-75页 |
| 3.1.2 PCAF(493-658)蛋白的表达和纯化 | 第75-78页 |
| 3.1.3 PCAF(493-658)蛋白的晶体筛选、衍射数据收集及解析 | 第78-82页 |
| 3.1.4 PCAF(493-658)蛋白的整体结构 | 第82-84页 |
| 3.1.5 溶液中PCAF(493-658)蛋白的二聚化 | 第84-90页 |
| 3.1.6 PCAF(493-658)蛋白二聚化对其乙酰转移酶活性的影响 | 第90-91页 |
| 3.1.7 PCAF乙酰转移酶活性的自我抑制 | 第91-95页 |
| 3.1.8 小结 | 第95-96页 |
| 3.2 hPCAF HAT和E1A复合体 | 第96-107页 |
| 3.2.1 腺病毒的E1A片段的表达质粒构建 | 第96-97页 |
| 3.2.2 PCAF HAT和E1A的相互作用 | 第97-100页 |
| 3.2.3 E1A对PCAF乙酰转移酶活性的影响 | 第100-101页 |
| 3.2.4 PCAF HAT和E1A复合体的晶体筛选 | 第101-107页 |
| 3.2.5 小结 | 第107页 |
| 3.3 p300和E1A复合体 | 第107-114页 |
| 3.3.1 p300蛋白的表达质粒构建、表达和纯化 | 第107-108页 |
| 3.3.2 p300与E1A的相互作用 | 第108-110页 |
| 3.3.3 p300与E1A复合体的纯化 | 第110-112页 |
| 3.3.4 p300与E1A复合体的晶体初筛 | 第112-113页 |
| 3.3.5 小结 | 第113-114页 |
| 3.4 讨论 | 第114-117页 |
| 附录1 图表索引 | 第117-119页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
