| 目录 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-28页 |
| 一、蛋白质组学和翻译后修饰概述 | 第10-12页 |
| 1.1 蛋白质组学研究概述 | 第10-11页 |
| 1.2 蛋白质翻译后修饰研究进展 | 第11-12页 |
| 二、蛋白质组学研究的方法手段 | 第12-18页 |
| 2.1 蛋白质的分离技术 | 第13-15页 |
| 2.1.1 二维凝胶电泳技术 | 第13页 |
| 2.1.2 多维液相色谱分离技术 | 第13-14页 |
| 2.1.3 毛细管电泳分离平台 | 第14-15页 |
| 2.2 常用鉴定和分析技术 | 第15-18页 |
| 2.2.1 生物质谱技术 | 第15-17页 |
| 2.2.2 生物信息学技术 | 第17-18页 |
| 三、蛋白质翻译后修饰的研究方法 | 第18-21页 |
| 3.1 磷酸化翻译后修饰研究 | 第18页 |
| 3.2 糖基化翻译后修饰研究 | 第18-19页 |
| 3.3 乙酰化翻译后修饰研究 | 第19-21页 |
| 3.3.1 研究乙酰化进程 | 第19-21页 |
| 3.3.2 研究乙酰化的技术手段 | 第21页 |
| 四、蛋白微阵列芯片技术 | 第21-25页 |
| 4.1 蛋白质芯片基本概念 | 第21-22页 |
| 4.2 蛋白芯片的种类 | 第22-23页 |
| 4.2.1 抗体芯片 | 第22-23页 |
| 4.2.2 蛋白芯片 | 第23页 |
| 4.2.3 功能芯片 | 第23页 |
| 4.3 蛋白芯片的应用 | 第23-25页 |
| 4.3.1 临床应用 | 第24页 |
| 4.3.2 新药物的研究开发 | 第24页 |
| 4.3.3 高通量蛋白质组学信号传递通路研究 | 第24-25页 |
| 五、肝癌转移研究概述 | 第25-26页 |
| 六、蛋白质组学高效酶解新技术 | 第26-27页 |
| 七、本论文选题目的以及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 利用蛋白芯片定量检测蛋白乙酰化修饰 | 第28-48页 |
| 一、研究背景 | 第28-29页 |
| 二、实验部分 | 第29-35页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-35页 |
| 2.2.1 标准乙酰化牛血清白蛋白(BSA-Ac)的合成 | 第31页 |
| 2.2.2 蛋白质含量测定 | 第31-32页 |
| 2.2.3 电泳及染色 | 第32-33页 |
| 2.2.4 免疫印迹 | 第33页 |
| 2.2.5 生物素标记蛋白抗体 | 第33-34页 |
| 2.2.6 蛋白芯片固定抗体 | 第34页 |
| 2.2.7 蛋白芯片与蛋白反应 | 第34-35页 |
| 2.2.8 数据检索和处理 | 第35页 |
| 三、结果与讨论 | 第35-47页 |
| 3.1 蛋白芯片的检测策略 | 第35-36页 |
| 3.2 验证合成的标准乙酰化蛋白(BSA-Ac) | 第36-37页 |
| 3.3 蛋白芯片条件的优化 | 第37-41页 |
| 3.3.1 探索阳性参照的稀释比 | 第37-38页 |
| 3.3.2 探索不同稀释溶液 | 第38页 |
| 3.3.3 不同温度(4℃和-80℃)保存 | 第38-39页 |
| 3.3.4 探索Strepavidin-Cy3的稀释比 | 第39-40页 |
| 3.3.5 捕获抗体和检测抗体浓度的筛选 | 第40-41页 |
| 3.4 检测芯片的特异性 | 第41-42页 |
| 3.5 利用芯片检测和定量蛋白的乙酰化水平 | 第42-43页 |
| 3.6 利用芯片检测和定量复杂体系中蛋白的乙酰化水平 | 第43-45页 |
| 3.7 同步检测BSA和BSA-Ac混合体系中的BSA水平和乙酰化水平 | 第45-47页 |
| 四、结论与展望 | 第47-48页 |
| 第三章 蛋白芯片用于检测疾病标志物的乙酰化水平 | 第48-58页 |
| 一、研究背景 | 第48-49页 |
| 二、实验部分 | 第49-52页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第49-50页 |
| 2.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 2.2.1 生物素标记蛋白抗体 | 第50页 |
| 2.2.2 蛋白芯片固定抗体 | 第50-51页 |
| 2.2.3 标准品的制备 | 第51页 |
| 2.2.4 蛋白芯片与蛋白反应 | 第51页 |
| 2.2.5 数据检索和处理 | 第51-52页 |
| 三、实验结果与讨论 | 第52-57页 |
| 3.1 乙酰化蛋白芯片的检测策略 | 第52-53页 |
| 3.2 探索合适的捕获抗体和检测抗体浓度 | 第53-54页 |
| 3.3 检测芯片的特异性 | 第54-55页 |
| 3.4 蛋白测定标准VEGF蛋白 | 第55页 |
| 3.5 利用标准加入法检测血清中VEGF蛋白浓度 | 第55-56页 |
| 3.6 蛋白芯片检测正常人和肝癌病人血清的VEGF含量和其乙酰化水平 | 第56-57页 |
| 四、结论和展望 | 第57-58页 |
| 第四章 蛋白质组学高效酶解新技术 | 第58-68页 |
| 一、研究背景 | 第58-61页 |
| 二、实验部分 | 第61-63页 |
| 2.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 三、结果与讨论 | 第63-67页 |
| 3.1 纤维芯固定Trypsin酶以及微芯片的表面表征 | 第63-65页 |
| 3.2 检测微芯片的可行性 | 第65-66页 |
| 3.3 利用微芯片检测低丰度蛋白 | 第66页 |
| 3.4 微芯片生物反应器的稳定性 | 第66-67页 |
| 四、结论和展望 | 第67-68页 |
| 发表论文情况 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
