| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第8-17页 |
| 1.1 棉铃虫简介 | 第8页 |
| 1.2 昆虫围食膜 | 第8页 |
| 1.3 围食膜的组分 | 第8-9页 |
| 1.4 围食膜的形成机制 | 第9页 |
| 1.5 围食膜的功能 | 第9-11页 |
| 1.6 围食膜潜在的害虫防治靶标位点 | 第11-12页 |
| 1.7 围食膜蛋白的种类 | 第12-15页 |
| 1.7.1 昆虫肠粘蛋白(IIM) | 第14页 |
| 1.7.2 IIMs 的功能 | 第14-15页 |
| 1.8 Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 | 第15-16页 |
| 1.9 本研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 肠粘蛋白 HaIIM72 在昆虫细胞中的表达 | 第17-36页 |
| 2.1 材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 供试昆虫与昆虫细胞系 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂及溶液 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基与筛选试剂 | 第17-19页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.6 常用仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 CTAB 法获取含有目的基因的质粒 | 第21页 |
| 2.2.2 目的基因的获取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 PCR 及酶切产物的纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.4 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.5 重组质粒 pFast-haiim72 的构建 | 第23页 |
| 2.2.6 转化大肠杆菌 | 第23-24页 |
| 2.2.7 酶切验证重组质粒 pFast-haiim72 | 第24页 |
| 2.2.8 重组质粒 pFast-haiim72 转化大肠杆菌 DH10Bac | 第24-25页 |
| 2.2.9 提取重组 bacmid-haiim72 | 第25页 |
| 2.2.10 PCR 鉴定重组 bacmid-haiim72 | 第25-26页 |
| 2.2.11 重组 bacmid-haiim72 的纯化 | 第26页 |
| 2.2.12 重组 bacmid-haiim72 侵染昆虫细胞 sf9 | 第26页 |
| 2.2.13 分离 P1 viral stock | 第26-27页 |
| 2.2.14 扩增 P1 viral stock | 第27页 |
| 2.2.15 肠粘蛋白 HaIIM72 的表达 | 第27页 |
| 2.2.16 HaIIM72 蛋白优化表达 | 第27页 |
| 2.2.17 制备再生几丁质 | 第27-28页 |
| 2.2.18 几丁质结合活性检测 | 第28页 |
| 2.2.19 HaIIM72 特异抗体的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.20 O-联糖苷酶对 HaIIM72 的处理 | 第29页 |
| 2.2.21 还原剂对 HaIIM72 二硫键的处理 | 第29页 |
| 2.2.22 TnGV Enhancin 对 HaIIM72 的体外处理 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 pET21b-haiim72 质粒的获得 | 第29-30页 |
| 2.3.2 粘蛋白基因 haiim72 的获得 | 第30页 |
| 2.3.3 重组质粒 pFast-haiim72 的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组 Bacmid-haiim72 的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.5 重组 bacmid-haiim72 转染昆虫细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.6 肠粘蛋白 HaIIM72 的真核表达 | 第32页 |
| 2.3.7 几丁质结合活性检测 | 第32-33页 |
| 2.3.8 肠粘蛋白 HaIIM72 去糖基化分析 | 第33页 |
| 2.3.9 还原剂 DTT 对肠粘蛋白 HaIIM72 的处理 | 第33页 |
| 2.3.10 昆虫杆状病毒增效蛋白 (enhancin) 对 HaIIM72 蛋白的降解作用 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 全文结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 附录 | 第42-44页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第44-45页 |
| 作者简历 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
