| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 茶树类黄酮生物合成 | 第15-17页 |
| 1.2 细胞色素P450酶 | 第17-18页 |
| 1.3 P450酶表达系统 | 第18-19页 |
| 1.4 类黄酮 3′-羟基化酶 | 第19-20页 |
| 1.5 类黄酮代谢工程 | 第20-25页 |
| 1.5.1 类黄酮植物代谢工程 | 第20-21页 |
| 1.5.2 类黄酮微生物代谢工程 | 第21-25页 |
| 1.6 研究目的、意义和研究内容 | 第25-27页 |
| 1.6.1 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 茶树类黄酮 3′-羟基化酶基因克隆及酶学分析 | 第27-47页 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.1 材料 | 第27页 |
| 2.1.2 试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 仪器 | 第28页 |
| 2.2 试验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 总RNA提取和cDNA第一链合成 | 第28页 |
| 2.2.2 CsF3′H中间序列克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.3 CsF3′H的RACE反应 | 第29-30页 |
| 2.2.4 CsF3'H与CsF3'5'H开放阅读框克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.5 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.2.6 酵母表达载体构建与转化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 微粒体制备与酶学检测 | 第32-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-45页 |
| 2.3.1 总RNA的提取与检测 | 第34-35页 |
| 2.3.2 基因克隆与序列分析 | 第35-40页 |
| 2.3.3 CsF3'H与CsF3'5'H酶学分析 | 第40-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 茶籽苗发育过程中CsF3′H表达分析 | 第47-56页 |
| 3.1 材料、试剂与仪器 | 第47页 |
| 3.1.1 材料 | 第47页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第47页 |
| 3.2 试验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 总RNA提取和cDNA第一链合成 | 第47页 |
| 3.2.2 茶树类黄酮生物合成途径中关键基因定量分析 | 第47-48页 |
| 3.2.3 儿茶素类物质组成与含量分析 | 第48-49页 |
| 3.2.4 数据分析 | 第49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 3.3.1 茶籽苗生长状况 | 第49-50页 |
| 3.3.2 不同发育阶段茶籽苗总RNA的提取与检测 | 第50页 |
| 3.3.3 不同发育阶段茶籽苗儿茶素类物质含量分析 | 第50-52页 |
| 3.3.4 CsF3′H在不同发育阶段茶籽苗中表达分析 | 第52-53页 |
| 3.3.5 基因表达与儿茶素类物质累积相关性分析 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 缺氮处理对CsF3′H表达的影响 | 第56-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 4.1.1 供试材料及预培养 | 第56页 |
| 4.1.2 试验处理 | 第56页 |
| 4.1.3 试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 4.1.4 总RNA的提取、cDNA第一链合成和荧光定量 | 第57页 |
| 4.1.5 儿茶素类物质组成与含量分析 | 第57页 |
| 4.2 结果与分析 | 第57-61页 |
| 4.2.1 缺氮处理样总RNA的提取与检测 | 第57-58页 |
| 4.2.2 缺氮处理对儿茶素类物质含量的影响 | 第58-60页 |
| 4.2.3 缺氮处理对CsF3′H基因表达的影响 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 紫色芽叶茶树中CsF3′H表达分析 | 第62-71页 |
| 5.1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第62页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第62-63页 |
| 5.1.3 叶色测定 | 第63页 |
| 5.1.4 总RNA的提取、cDNA第一链合成和荧光定量 | 第63页 |
| 5.1.5 花青素、儿茶素类物质含量分析 | 第63页 |
| 5.2 结果与分析 | 第63-68页 |
| 5.2.1 紫叶总RNA的提取与检测 | 第63-64页 |
| 5.2.2 紫色芽叶色泽 | 第64-65页 |
| 5.2.3 紫色芽叶中儿茶素类物质与花青素含量 | 第65-67页 |
| 5.2.4 紫色芽叶中CsF3?H和其他类黄酮生物合成相关基因表达分析 | 第67-68页 |
| 5.2.5 总儿茶素、花青素累积与相关基因表达的相关性分析 | 第68页 |
| 5.3 讨论 | 第68-70页 |
| 5.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第六章 CsF3′H在代谢工程中的应用 | 第71-90页 |
| 6.1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 6.1.1 试验菌株、质粒与试剂 | 第71页 |
| 6.1.2 DNA操作 | 第71-72页 |
| 6.1.3 表达载体构建 | 第72-74页 |
| 6.1.4 生物发酵 | 第74页 |
| 6.1.5 发酵产物提取与分析 | 第74-75页 |
| 6.1.6 重组蛋白纯化 | 第75页 |
| 6.1.7 重组蛋白酶学分析 | 第75页 |
| 6.2 结果与分析 | 第75-87页 |
| 6.2.1 圣草酚、二氢槲皮素和槲皮素生物合成 | 第75-78页 |
| 6.2.2 山奈酚生物合成 | 第78-85页 |
| 6.2.3 以柚皮素为底物生物合成槲皮素 | 第85-87页 |
| 6.3 讨论 | 第87-88页 |
| 6.4 本章小结 | 第88-90页 |
| 第七章 结论与展望 | 第90-93页 |
| 7.1 结论 | 第90-91页 |
| 7.2 创新点 | 第91-92页 |
| 7.3 下一步拟开展工作 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
