| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 转基因动物研究概述 | 第11-19页 |
| 第二章 牛结核病的研究 | 第19-22页 |
| ·牛结核病的危害 | 第19页 |
| ·牛结核病的病理特点 | 第19页 |
| ·牛结核病的诊断 | 第19-20页 |
| ·细菌学检查方法 | 第19-20页 |
| ·牛结核病的防治 | 第20-22页 |
| ·政府部门对结核病应高度重视 | 第20-21页 |
| ·加强饲养管理和环境消毒 | 第21页 |
| ·对牛场饲养员和农民加强科普宣传 | 第21页 |
| ·牛场应建立牛群档案 | 第21-22页 |
| 第三章 Ip11 基因的研究 | 第22-24页 |
| ·结核病与巨噬细胞 | 第22页 |
| ·Ip11 基因的发现与功能 | 第22-23页 |
| ·Ip11 基因的发现为治疗结核病提供了新的思路 | 第23-24页 |
| 第四章 含Ip11 融合表达载体的构建及在巨噬细胞内的表达 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·组织和细胞来源 | 第24页 |
| ·质粒、菌株 | 第24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·C578L/6J 肺组织总RNA 提取 | 第26页 |
| ·特异性引物设计 | 第26页 |
| ·Ip11 基因的总RNA 提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR | 第26页 |
| ·Ip11 基因的PCR | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第27页 |
| ·目的片段的亚克隆、转化及质粒提取 | 第27-28页 |
| ·内切酶ECOR1 和Pst1 酶切鉴定重组质粒pTA Ip11 | 第28页 |
| ·pEGFP-C1-Ip11 融合表达载体的构建 | 第28页 |
| ·含有SacI 和PstI 酶切位点的Ip11 引物及基因合成 | 第28-29页 |
| ·SacI 和PstI 分别酶切含SacI 和PstI 酶切位点的Ip11 与pEGFP-C1 | 第29页 |
| ·连接、转化、提取质粒、酶切鉴定 | 第29页 |
| ·RAW264.7 细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·pEGFP-C1 和pEGFP-C1-Ip11 分别转染RAW264.7 细胞 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-32页 |
| ·巨噬细胞的培养 | 第30页 |
| ·提取的总RNA 鉴定 | 第30-31页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒pTA Ip11 | 第31页 |
| ·融合蛋白载体pEGFP-C1-Ip11 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白绿色荧光蛋白表达 | 第32页 |
| ·小结 | 第32-34页 |
| 第五章 Ip11 巨噬细胞特异性表达载体的构建 | 第34-41页 |
| ·材料和方法 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·Ip11 基因的克隆 | 第37页 |
| ·pEGFP-C1-Ip11 的构建 | 第37页 |
| ·SP 启动子扩增 | 第37-38页 |
| ·pSPEGFP-N1 分别转染RAW264.7 细胞和牛胎儿成纤维细胞 | 第38页 |
| ·pSP-EGFP-Ip11 载体的构建 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39-41页 |
| 第六章 牛胎儿皮肤成纤维细胞的培养及转染Ip11 基因 | 第41-50页 |
| ·材料和方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·胎儿皮肤成纤维细胞的生长特性 | 第44页 |
| ·细胞生长曲线绘制 | 第44-45页 |
| ·质粒的纯化 | 第45页 |
| ·细胞抗性实验 | 第45页 |
| ·转染方案优化及转染效率 | 第45-46页 |
| ·抗性细胞的单克隆筛选 | 第46-47页 |
| ·转基因细胞核型分析 | 第47-48页 |
| ·PCR 检测结果 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第七章 整合Ip11 基因的牛克隆胚的制备 | 第50-56页 |
| ·材料和方法 | 第50-52页 |
| ·实验试剂与用品 | 第50页 |
| ·仪器设备 | 第50页 |
| ·卵母细胞成熟培养液及胚胎培养液配制 | 第50-51页 |
| ·卵母细胞的采集 | 第51页 |
| ·卵母细胞的成熟 | 第51页 |
| ·成熟卵母细胞的去核 | 第51-52页 |
| ·供体细胞的准备 | 第52页 |
| ·卵母细胞的注核与融合 | 第52页 |
| ·克隆胚的激活及培养 | 第52页 |
| ·转基因阳性囊胚的检测 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-54页 |
| ·转基因克隆胚的获得 | 第52-53页 |
| ·转基因克隆胚PCR 鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
