| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 前言 | 第17-21页 |
| 第一章 利用TALEN技术构建胃癌细胞MYH9基因沉默细胞株 | 第21-36页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 细胞系及培养条件 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第23页 |
| 2 试验方法 | 第23-31页 |
| 2.1 细胞培养、冻存及复苏 | 第23-25页 |
| 2.2 TALEN质粒左右臂构建 | 第25-29页 |
| 2.3 TALEN质粒活性检测 | 第29-30页 |
| 2.4 利用TALEN质粒建立MGC-803MYH9基因敲低细胞系 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-33页 |
| 3.1 构建TALEN质粒左右臂 | 第31页 |
| 3.2 转染细胞并测活性 | 第31-32页 |
| 3.3 筛选阳性克隆并成功构建MYH9基因敲低单克隆细胞株 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 第二章 MGC803 MYH9基因沉默细胞株验证及细胞增殖与凋亡功能检测 | 第36-55页 |
| 1 实验材料 | 第36-38页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第36页 |
| 1.2 主要仪器 | 第36-37页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-48页 |
| 2.1 qRT-PCR检测胃癌细胞中MYH9 mRNA表达 | 第38-41页 |
| 2.2 Western blot检测胃癌细胞中MYH9蛋白表达 | 第41-47页 |
| 2.3 CCK-8法检测细胞增殖 | 第47页 |
| 2.4 流式细胞仪检测细胞周期 | 第47-48页 |
| 2.5 细胞凋亡实验检测细胞凋亡情况 | 第48页 |
| 2.6 统计方法 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| 3.1 胃癌细胞株中MYH9基因在mRNA水平的表达情况 | 第48-49页 |
| 3.2 胃癌细胞株中MYH9基因在蛋白水平的表达情况 | 第49-50页 |
| 3.3 MYH9基因敲低后细胞生长速度受到抑制 | 第50-51页 |
| 3.4 MYH9基因敲低后细胞周期受阻于G2/M期 | 第51-52页 |
| 3.5 MYH9基因敲低后细胞早期凋亡增加 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 全文小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 中英文缩略词表 | 第63-66页 |
| 攻读硕士学位期间成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
