| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语中英文对照 | 第9-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| 1.1 鱼类MSTN基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.1 鱼类MSTN基因的结构和表达类型 | 第14-15页 |
| 1.1.2 MSTN基因在鱼类生产中的研究进展 | 第15页 |
| 1.2 miRNAs的研究现状及其应用功能 | 第15-18页 |
| 1.2.1 miRNAs的研究背景及简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 miRNAs合成机制 | 第16页 |
| 1.2.3 miRNAs目标基因的预测方法 | 第16-17页 |
| 1.2.4 miRNAs在不同组织中的表达研究 | 第17页 |
| 1.2.5 鱼类miRNAs的相关功能 | 第17-18页 |
| 1.3 鱼类肌肉生长相关miRNAs的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 鱼类肌肉发育相关miRNAs研究进展 | 第18页 |
| 1.3.2 鱼类MSTN基因相关miRNAs的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 miRNAs在本实验中的应用讨论 | 第19-20页 |
| 第二章 淇河鲫MSTN基因 3’UTR的克隆 | 第20-40页 |
| 2.1 材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第20页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.5 试剂配制与实验准备 | 第22-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 组织取样及总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 第一链cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.2.4 淇河鲫MSTN基因部分片段的克隆 | 第27-34页 |
| 2.2.5 3’UTR片段和加突变位点的 3’UTR片段的双酶切 | 第34-35页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.3.1 Total RNA的质量检测 | 第35页 |
| 2.3.2 淇河鲫MSTN基因 3’UTR序列全长 | 第35-36页 |
| 2.3.3 淇河鲫MSTN基因 3’UTR序列 | 第36-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 淇河鲫MSTN基因相关miRNAs的预测、验证及克隆 | 第40-50页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 3.1.1 实验样本 | 第40页 |
| 3.1.2 实验试剂、耗材及仪器 | 第40页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第40页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2 预测MSTN相关miRNAs | 第42-44页 |
| 3.2.1 预测miRNAs的相关软件 | 第42页 |
| 3.2.2 MSTN相关miRNAs的预测结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 预测相关miRNAs的验证 | 第43-44页 |
| 3.3 候选miRNAs的克隆与双酶切 | 第44-45页 |
| 3.3.1 miRNAs的克隆 | 第44-45页 |
| 3.3.2 miRNAs的双酶切 | 第45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 真核载体的构建及双荧光检测 | 第50-60页 |
| 4.1 材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 主要载体 | 第50页 |
| 4.1.2 构建载体所需要的主要试剂及耗材 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第50-51页 |
| 4.2 方法 | 第51-55页 |
| 4.2.1 真核载体的构建 | 第51-53页 |
| 4.2.2 构建含有miR-181a和miR-181b的慢病毒载体 | 第53-54页 |
| 4.2.3 293T细胞的培养 | 第54页 |
| 4.2.4 构建的真核表达载体和含有miRNAs的慢病毒载体共转染 293T细胞 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-59页 |
| 4.3.1 293T细胞形态学观察 | 第55-56页 |
| 4.3.2 293T细胞转染效率观察 | 第56-57页 |
| 4.3.3 双荧光检测结果 | 第57-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 MSTN和miR-181a在肌肉组织中的表达定位 | 第60-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 实验用鱼 | 第60页 |
| 5.1.2 试剂及配制 | 第60页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第60-61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 石蜡包埋 | 第61页 |
| 5.2.2 探针序列 | 第61页 |
| 5.2.3 荧光检测步骤 | 第61-62页 |
| 5.2.4 注意事项 | 第62-63页 |
| 5.3 实验结果 | 第63-65页 |
| 5.3.1 肌肉细胞形态学结构 | 第63页 |
| 5.3.2 原位杂交荧光分析 | 第63-65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 淇河鲫MSTN基因和miR-181a/b特异性表达 | 第66-72页 |
| 6.1 材料 | 第66页 |
| 6.1.1 实验用鱼 | 第66页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第66页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第66页 |
| 6.2 方法 | 第66-69页 |
| 6.2.1 组织取样及总RNA提取 | 第66-67页 |
| 6.2.2 第一链cDNA合成 | 第67-68页 |
| 6.2.3 淇河鲫MSTN基因和miR-181a和miR-181b实时定量PCR | 第68-69页 |
| 6.3 实验结果 | 第69-70页 |
| 6.3.1 Total RNA的质量检测 | 第69页 |
| 6.3.2 淇河鲫不同组织中MSTN基因和miR-181a、mi R-181b特异性分析 | 第69-70页 |
| 6.3.3 淇河鲫胚胎发育不同时期MSTN基因和miR-181a、miR-181b特异性表达分析 | 第70页 |
| 6.4 讨论 | 第70-72页 |
| 小结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读学位期间学术业绩 | 第82-83页 |
