| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 核糖核酸酶概述 | 第13-14页 |
| 1.2 几种常见的核糖核酸酶 | 第14-20页 |
| 1.2.1 牛胰腺核糖核酸酶A(RNase A) | 第14-15页 |
| 1.2.2 牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase) | 第15页 |
| 1.2.3 牛精核糖核酸酶(BS-RNase) | 第15-16页 |
| 1.2.4 血管生成素(Angiogenin,ANG) | 第16-17页 |
| 1.2.5 两栖酶( Amphinase) | 第17-18页 |
| 1.2.6 豹蛙抗瘤酶(P30，onconase，ONC) | 第18-20页 |
| 1.3 豹蛙抗瘤酶(ONC)的研究现状 | 第20-25页 |
| 1.3.1 ONC的作用机理 | 第20-22页 |
| 1.3.2 ONC与其它药物的协同作用、免疫调节和抗病毒作用 | 第22-23页 |
| 1.3.3 ONC与细胞凋亡 | 第23页 |
| 1.3.4 rONC的临床应用 | 第23-24页 |
| 1.3.5 ONC的前景展望 | 第24-25页 |
| 1.4 人血清白蛋白(HSA)的作用研究 | 第25-27页 |
| 1.4.1 HSA的结构 | 第25页 |
| 1.4.2 HSA的理化性质 | 第25-27页 |
| 1.4.3 HSA的应用 | 第27页 |
| 1.5 融合蛋白的特点及应用 | 第27-30页 |
| 1.5.1 融合蛋白的概念 | 第27页 |
| 1.5.2 融合蛋白的特点 | 第27-28页 |
| 1.5.3 融合蛋白的应用 | 第28-30页 |
| 1.6 研究目的、意义和内容 | 第30-33页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第30页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第30页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第30-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-43页 |
| 2.1 主要耗材及仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 主要试剂及配制 | 第34-37页 |
| 2.3 rONC及其融合蛋白的获得 | 第37-38页 |
| 2.3.1 rONC及其融合蛋白的构建与表达 | 第37-38页 |
| 2.3.2 rONC及其融合蛋白的层析 | 第38页 |
| 2.4 大鼠肝癌细胞RH-35 的培养 | 第38页 |
| 2.5 细胞活性检测：磺酰罗丹明B比色法 | 第38-39页 |
| 2.6 细胞生长状态观察: 普通光学显微镜 | 第39页 |
| 2.7 细胞凋亡检测：Hoechst33258染色法 | 第39页 |
| 2.8 细胞凋亡检测：AnnexinV-FITC/PI双标记法 | 第39-40页 |
| 2.9 细胞周期检测：流式细胞术(Flow-Cytometry) | 第40页 |
| 2.10 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR) | 第40-41页 |
| 2.11 SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第41页 |
| 2.12 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第41-42页 |
| 2.13 细胞迁移能力检测：划痕实验法 | 第42页 |
| 2.14 统计学分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-51页 |
| 3.1 rONC及rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC对RH-35 细胞活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.2 rONC和rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC对细胞生长状态的影响 | 第44-45页 |
| 3.3 Hoechst33258染 色和Annexin V-FITC/PI双 染法流式检测rONC及rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC对细胞凋亡的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 流式检测rONC及rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC融合蛋白对细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| 3.5 rONC及rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC融合蛋白对细胞增殖/凋亡相关基因和蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6 rONC及其rHSA-M_(0,1,2,3)-ONC融合蛋白对RH-35 细胞迁移的影响 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表的论文 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
