| 中文摘要 | 第3-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 附件 | 第19-27页 |
| 第一章 绪论 | 第27-39页 |
| 1. 肌腱的生理组成 | 第27页 |
| 2. 肌腱的功能 | 第27-28页 |
| 3. 肌腱血管化 | 第28页 |
| 4. 肌腱内的细胞 | 第28页 |
| 5. 肌腱的ECM(细胞外基质)及形成 | 第28-30页 |
| 6. 与其他组织相互作用 | 第30页 |
| 7. 肌腱的损伤与修复 | 第30-31页 |
| 8. 肌腱损伤后手术和重建策略 | 第31-32页 |
| 9. 肌腱组织工程中的生物材料 | 第32-35页 |
| 9.1 支架材料 | 第32页 |
| 9.2 组织工程支架材料的类型 | 第32-33页 |
| 9.3 合成支架材料 | 第33页 |
| 9.4 天然支架 | 第33-34页 |
| 9.5 复合支架 | 第34-35页 |
| 10. 肌腱组织工程中的细胞类型 | 第35-38页 |
| 10.1 孤雌胚胎干细胞(pSCs) | 第36-37页 |
| 10.2 pSCs作为组织工程种子细胞的优势 | 第37-38页 |
| 11 本论文研究的主要内容及意义 | 第38-39页 |
| 第二章 pSCs的体外培养及全能性鉴定 | 第39-53页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 实验材料 | 第39页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第39-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.1 制备滋养层 | 第41页 |
| 2.2 pSCs和ESCs体外培养 | 第41-42页 |
| 2.3 pSCs和ESCs传代 | 第42页 |
| 2.4 pSCs和ESCs的冻存 | 第42页 |
| 2.5 试剂的配制 | 第42页 |
| 2.6 pSCs和ESCs的生物特征 | 第42-43页 |
| 2.6.1 免疫细胞化学检测全能性标记物 | 第42-43页 |
| 2.6.2 碱性磷酸酶染色 | 第43页 |
| 2.6.3 透射电镜观察 | 第43页 |
| 2.7 克隆形成实验 | 第43页 |
| 2.8 WST-1实验 | 第43页 |
| 2.9 实时定量PCR | 第43-45页 |
| 3. 实验结果 | 第45-51页 |
| 3.1 pSCs和ESCs的形态学观察 | 第45-46页 |
| 3.2 碱性磷酸酶(ALP)染色 | 第46页 |
| 3.3 透射电镜观察 | 第46-47页 |
| 3.4 免疫细胞化学检测全能性标记物 | 第47-48页 |
| 3.5 WST-1实验 | 第48-49页 |
| 3.6 克隆形成实验 | 第49-51页 |
| 4. 讨论 | 第51-52页 |
| 5. 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 pSCs形成EBs的效率与凋亡 | 第53-58页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 实验材料 | 第53页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-55页 |
| 2.1 EBs的形成 | 第54页 |
| 2.2 EBs石蜡包埋 | 第54页 |
| 2.3 H&E染色 | 第54-55页 |
| 2.4 TUNEL实验 | 第55页 |
| 3 实验结果 | 第55-56页 |
| 3.1 pSCs和ESCs的EBs形成效率 | 第55页 |
| 3.2 pSCs和ESCs形成EBs的凋亡情况 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 pSCs体外与体内分化 | 第58-71页 |
| 1 材料 | 第58-61页 |
| 1.1 实验材料 | 第58页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第58-61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| 2.1 接种EBs | 第61页 |
| 2.2 观察EBs的自主分化 | 第61页 |
| 2.3 实时定量PCR | 第61页 |
| 2.4 免疫细胞化学检测上皮-间充质转化及中胚层标记物 | 第61-62页 |
| 2.5 畸胎瘤实验 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-69页 |
| 3.1 镜下观察EBs的自主分化 | 第62-63页 |
| 3.2 实时定量PCR检测ESCs和pSCs向内,中,外胚层分化 | 第63-65页 |
| 3.3 免疫细胞化学检测EMT和中胚层相关因子 | 第65-67页 |
| 3.4 实时定量PCR检测EMT | 第67-68页 |
| 3.5 畸胎瘤实验 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 体外获取pSCs和ESCs的间充质细胞并鉴定 | 第71-78页 |
| 1 材料 | 第71-73页 |
| 1.1 实验材料 | 第71页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第71-73页 |
| 2 实验方法 | 第73-74页 |
| 2.1 获取pMSCs及eMSCs | 第73页 |
| 2.2 流式细胞术检测细胞表面抗原 | 第73页 |
| 2.3 免疫细胞化学检测中胚层标记物 | 第73-74页 |
| 3 实验结果 | 第74-76页 |
| 3.1 获取pMSCs及eMSCs | 第74页 |
| 3.2 流式细胞术检测细胞表面抗原 | 第74-75页 |
| 3.3 免疫细胞化学检测中胚层标志 | 第75-76页 |
| 4. 讨论 | 第76-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 第六章 间充质细胞向骨,软骨及脂肪细胞分化实验 | 第78-88页 |
| 1 材料 | 第78-81页 |
| 1.1 实验材料 | 第78页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第78-81页 |
| 2 实验方法 | 第81-82页 |
| 2.1 成骨诱导 | 第81页 |
| 2.2 软骨诱导 | 第81页 |
| 2.3 脂肪诱导 | 第81页 |
| 2.4 实时定量PCR | 第81页 |
| 2.5 免疫细胞化学检测成软骨,成脂标记物 | 第81-82页 |
| 2.6 特殊染色 | 第82页 |
| 2.6.1 茜素红染色 | 第82页 |
| 2.6.3 Von Kossa染色 | 第82页 |
| 2.6.4 番红O染色 | 第82页 |
| 2.6.5 油红O染色 | 第82页 |
| 3 实验结果 | 第82-86页 |
| 3.1 成骨诱导实验结果 | 第82-84页 |
| 3.2 成软骨诱导实验结果 | 第84-85页 |
| 3.3 成脂诱导实验 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-87页 |
| 5 小结 | 第87-88页 |
| 第七章 间充质细胞向肌腱细胞分化实验 | 第88-101页 |
| 1 材料 | 第88-91页 |
| 1.1 实验材料 | 第88页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第88-91页 |
| 2 实验方法 | 第91-93页 |
| 2.1 原代培养 | 第91-92页 |
| 2.1.1 肌腱细胞原代培养 | 第91页 |
| 2.1.2 小鼠骨髓间充质细胞原代培养(BMSCs) | 第91页 |
| 2.1.3 小鼠皮肤成纤维细胞原代培养(Fibroblast) | 第91-92页 |
| 2.3 实时定量PCR | 第92页 |
| 2.4 细胞加载应力 | 第92页 |
| 2.5 实时定量PCR | 第92页 |
| 2.6 免疫细胞化学检测肌腱细胞标记物 | 第92页 |
| 2.7 Western-bolt实验 | 第92-93页 |
| 2.8 WST-1实验 | 第93页 |
| 3 实验结果 | 第93-99页 |
| 3.1 原代培养实验结果 | 第93页 |
| 3.2 实时定量PCR检测col1al：col3a1 | 第93-94页 |
| 3.3 持续24小时加力实时定量PCR检测肌腱细胞相关表型 | 第94-95页 |
| 3.4 pMSCs 24小时加力Western-blot检测肌腱细胞相关表型 | 第95-96页 |
| 3.5 间隔加力10天实时定量PCR检测肌腱细胞相关表型 | 第96-97页 |
| 3.6 pMSCs间隔加力10天Western-blot检测肌腱细胞相关表型 | 第97页 |
| 3.7 pMSCs间隔加力10天后免疫细胞化学检测肌腱细胞相关表型 | 第97-99页 |
| 3.8 间隔加力10天后细胞增殖实验 | 第99页 |
| 4 讨论 | 第99-100页 |
| 5 小结 | 第100-101页 |
| 第八章 应力诱导后的pMSCs接种PLGA | 第101-106页 |
| 1 材料 | 第101-102页 |
| 1.1 实验材料 | 第101页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第101-102页 |
| 2 实验方法 | 第102-103页 |
| 2.1 CM-Dil染色 | 第102页 |
| 2.2 细胞接种PLGA支架 | 第102页 |
| 2.3 评估细胞在PLGA上生长 | 第102-103页 |
| 2.3.1 激光共聚焦显微镜观察 | 第102页 |
| 2.3.2 扫描电子显微镜观察 | 第102-103页 |
| 2.3.3 提取DNA | 第103页 |
| 3 实验结果 | 第103-105页 |
| 3.1 激光共聚焦显微镜观察pMSCs~i+PLGA | 第103页 |
| 3.2 电子显微镜观察pMSCs~i+PLGA | 第103-104页 |
| 3.3 DNA含量测定 | 第104-105页 |
| 4 讨论 | 第105页 |
| 5. 小结 | 第105-106页 |
| 第九章 pMSCs~i-PLGA体内评估 | 第106-113页 |
| 1 材料 | 第106-107页 |
| 1.1 实验材料 | 第106页 |
| 1.2 实验器材和试剂 | 第106-107页 |
| 2 实验方法 | 第107-108页 |
| 2.1 pMSCs~i+PLGA异位移植裸鼠皮下 | 第107页 |
| 2.2 组织学染色 | 第107页 |
| 2.2.1 H&E染色 | 第107页 |
| 2.2.2 Masson染色 | 第107页 |
| 2.3 免疫组织化学实验 | 第107-108页 |
| 2.4 透射电镜观察 | 第108页 |
| 3 实验结果 | 第108-112页 |
| 3.1 体内移植后大体观察 | 第108-109页 |
| 3.2 体内移植6周后组织学观察 | 第109页 |
| 3.3 体内移植6周后移植物免疫组化实验结果 | 第109-110页 |
| 3.4 体内移植12周后组织学观察 | 第110页 |
| 3.5 体内移植12周后移植物免疫组化实验 | 第110-111页 |
| 3.6 透射电镜观察 | 第111-112页 |
| 4 讨论 | 第112页 |
| 5 小结 | 第112-113页 |
| 全文结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 作者简介 | 第128页 |
