| 中文摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-26页 |
| 第一章 皮蝇素概述 | 第14-16页 |
| 1 皮蝇生活史简述 | 第14页 |
| 2 皮蝇素分类及其生物学特性 | 第14-15页 |
| 3 小结 | 第15-16页 |
| 第二章 皮蝇素A、C的免疫调节机制 | 第16-20页 |
| 1 寄生虫免疫逃避机制 | 第16-17页 |
| 2 异种移植器官“寄生虫化”为解决移植排斥反应提供新途径 | 第17-18页 |
| 3 小结 | 第18-20页 |
| 第三章 补体系统在异种器官移植中的免疫调节作用 | 第20-23页 |
| 1 补体系统概述 | 第20页 |
| 2 补体系统在异种器官移植中的作用 | 第20-21页 |
| 3 小结 | 第21-23页 |
| 第四章 转基因小鼠技术研究进展 | 第23-25页 |
| 1 转基因小鼠动物模型的构建方法 | 第23-24页 |
| 2 转基因小鼠在免疫学及异种移植研究中的应用 | 第24页 |
| 3 小结 | 第24-25页 |
| 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 试验研究 | 第26-82页 |
| 第一章 皮蝇素A、C基因克隆及分泌型真核表达载体的构建 | 第26-42页 |
| 1 材料 | 第26-29页 |
| 1.1 实验动物 | 第26页 |
| 1.2 试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 仪器 | 第27页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第27-29页 |
| 2. 方法 | 第29-36页 |
| 2.1 DNA提取 | 第29页 |
| 2.2 引物设计及PCR扩增 | 第29-31页 |
| 2.3 RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.4 总RNA中DNA的消除 | 第32页 |
| 2.5 RT-PCR | 第32-33页 |
| 2.6 重组真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP和pEF1α-HC-AcGFP的构建与鉴定 | 第33-36页 |
| 3 结果 | 第36-40页 |
| 3.1. HA基因的cDNA序列扩增 | 第36页 |
| 3.2 HA真核表达载体的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3. HC基因的cDNA序列扩增 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 皮蝇素A抗体的制备及鉴定 | 第42-47页 |
| 1. 主要材料 | 第42页 |
| 2. 方法 | 第42-44页 |
| 2.1 生物学分析及多肽的设计 | 第42-43页 |
| 2.2 多肽的合成及载体的偶联 | 第43页 |
| 2.3 抗HA多肽抗体的制备 | 第43页 |
| 2.4 ELISA检测多克隆抗体的效价 | 第43页 |
| 2.5 Western blotting分析抗血清和多克隆抗体的特异性 | 第43-44页 |
| 3. 结果 | 第44-46页 |
| 3.1 采用生物信息方法预测多肽序列 | 第44-45页 |
| 3.2 抗血清或多克隆抗体效价 | 第45页 |
| 3.3 Western印迹检测HA抗体特异性 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 皮蝇素转基因表达载体体外转染 | 第47-61页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1 实验动物和细胞 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-53页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代和冻存 | 第48-50页 |
| 2.2 细胞脂质体转染 | 第50页 |
| 2.3 HA、HC Cos7细胞稳定株的筛选 | 第50页 |
| 2.4 免疫共沉淀CO-IP | 第50-51页 |
| 2.5 western blot检测 | 第51页 |
| 2.6 EMSA实验 | 第51-52页 |
| 2.7 统计学处理 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-60页 |
| 3.1 RT-PCR检测 | 第53页 |
| 3.2 pEF1α-CD-HA-GFP脂质体转染Cos7细胞 | 第53-54页 |
| 3.3 Western-blot检测外源性HA在cos7细胞中的表达 | 第54页 |
| 3.4 免疫共沉淀检测HA与补体C3 | 第54页 |
| 3.5 Western blot和ELISA测定HA降解C3 | 第54-55页 |
| 3.6 EMSA实验检测HA与C3结合位点 | 第55-57页 |
| 3.7 pEF1α-CD-HC-GFP脂质体转染Cos7细胞 | 第57页 |
| 3.8 western blot和ELISA测定HC与C3之间的作用 | 第57-58页 |
| 3.9 设计生物素探针,应用EMSA方法,证实HC与补体C3结合位点(S229,G230,A231) | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-61页 |
| 第四章 皮蝇素A、皮蝇素C转基因小鼠模型的建立 | 第61-71页 |
| 1 主要材料仪器 | 第61-62页 |
| 1.1 主要仪器 | 第61页 |
| 1.2 材料与试剂 | 第61-62页 |
| 2 方法 | 第62-66页 |
| 2.1 注射用线性化载体DNA的制备 | 第62页 |
| 2.2 pEFl a -CD-HA-GFP和pEF1 a -CD-HC-GFP转基因表达载体酶切 | 第62页 |
| 2.3 琼脂糖胶检测酶切产物 | 第62-63页 |
| 2.4 割胶回收 | 第63页 |
| 2.5 受精卵准备 | 第63页 |
| 2.6 雄性FVB和C57BL小鼠的输精管结扎 | 第63页 |
| 2.7 假孕母鼠制备 | 第63-64页 |
| 2.8 受精卵微显微注射线性化的目的基因 | 第64页 |
| 2.9 输卵管内受精卵移植 | 第64页 |
| 2.10 首建鼠的鉴定 | 第64-65页 |
| 2.11 pEF1α-CD-HA-GFP和pEF1α-CD-HC-GFP转基因小鼠的传代及鉴定 | 第65页 |
| 2.12 pEF1α-CD-HA-GFP目的蛋白的表达分析 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-69页 |
| 3.1 pEF1α-CD-HA-GFP转基因首建鼠鉴定结果 | 第66页 |
| 3.2 pEF1α-CD-HC-GFP转基因首建鼠鉴定结果 | 第66-68页 |
| 3.3 pEF1α-CD-HA-GFP转基因小鼠F1代PCR鉴定结果 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 皮蝇素A转基因小鼠皮肤移植、抑制移植排斥研究 | 第71-82页 |
| 1 主要材料 | 第71-72页 |
| 1.1 主要实验动物和试剂 | 第71页 |
| 1.2 溶液的配制 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-75页 |
| 3 结果 | 第75-80页 |
| 3.1 皮肤免疫组化 | 第75-77页 |
| 3.2 皮肤移植后C3,C9,CD4,B7-2、MHC Ⅱ的Western-blot检测 | 第77-79页 |
| 3.3 HE染色 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读博士学位期间发表论文、课题及成果 | 第93-94页 |
