| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 主要英文缩写与译名 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1. 引言 | 第15页 |
| 2. CRISPR/Cas系统介绍 | 第15-21页 |
| 2.1 CRISPR/Cas系统的来源 | 第16页 |
| 2.2 CRISPR/Cas系统的组成和结构特点 | 第16-19页 |
| 2.2.1 CRISPR结构 | 第16-17页 |
| 2.2.2 Cas基因 | 第17-18页 |
| 2.2.3 CRISPR/Cas系统的分类 | 第18-19页 |
| 2.3 CRISPR/Cas系统的工作机理 | 第19-21页 |
| 3. CRISPR/Cas9系统的应用 | 第21-26页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9研究现状 | 第21-22页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9在基因编辑中的应用 | 第22-23页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9敲除基因的机制 | 第23-24页 |
| 3.4 CRISPR/Cas9脱靶效应 | 第24-25页 |
| 3.5 CRISPR/Cas9其他方面的应用 | 第25-26页 |
| 4. 家蚕丝腺介绍 | 第26-30页 |
| 4.1 家蚕丝腺的形态特点与功能 | 第26-27页 |
| 4.2 家蚕丝腺的组织结构 | 第27-28页 |
| 4.3 家蚕丝腺的发育概况 | 第28-30页 |
| 4.3.1 家蚕丝腺发育的基本过程 | 第28页 |
| 4.3.2 家蚕丝腺发育的分子机理 | 第28-30页 |
| 5. 家蚕Bmsage基因研究概况 | 第30-31页 |
| 6. 反向遗传学技术 | 第31-32页 |
| 7. 第二代高通量测序技术 | 第32-33页 |
| 8. 研究目的及意义 | 第33页 |
| 9. 主要内容 | 第33-34页 |
| 9.1 利用CRISPR/Cas9研究家蚕体壁等相关基因的功能 | 第33页 |
| 9.2 利用CRISPR/Cas9研究家蚕丝腺相关基因的功能 | 第33-34页 |
| 10. 技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 利用CRISPR/Cas9研究家蚕体壁相关基因的功能 | 第35-61页 |
| 1. 引言 | 第35-36页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第36-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 2.1.1 家蚕 | 第36页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第37页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| 2.1.5 DNA测序 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-47页 |
| 2.2.1 蚕卵滞育性的解除 | 第39页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9靶点设计 | 第39页 |
| 2.2.3 所选基因靶点序列的确认 | 第39-40页 |
| 2.2.4 Cas9-mRNA的体外合成 | 第40-42页 |
| 2.2.5 sgRNA的体外合成 | 第42-44页 |
| 2.2.6 家蚕卵的显微注射 | 第44-45页 |
| 2.2.7 突变率和突变类型的检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8 脱靶效应的检测 | 第46页 |
| 2.2.9 突变体表型筛选 | 第46-47页 |
| 2.2.10 蛾子交配策略 | 第47页 |
| 3. 实验结果 | 第47-59页 |
| 3.1 Bm-ok敲除结果 | 第48-54页 |
| 3.2 BmKMO、BmTH和Bmtan敲除结果 | 第54-57页 |
| 3.3 脱靶效应的检测 | 第57-59页 |
| 4. 讨论 | 第59-61页 |
| 第三章 利用CRISPR/Cas9研究家蚕丝腺发育相关基因的功能 | 第61-76页 |
| 1. 引言 | 第61页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第61-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 2.1.1 家蚕 | 第61页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第61页 |
| 2.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
| 2.1.4 DNA测序 | 第62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62页 |
| 2.2.1 Bmsage注射死胚的检测 | 第62页 |
| 2.2.2 Bmsage G_0代蛾子的检测 | 第62页 |
| 2.2.3 Bmsage突变体筛选和表型分析 | 第62页 |
| 2.2.4 Bmsage突变体表型的确认 | 第62页 |
| 3. 实验结果 | 第62-74页 |
| 3.1 Bmsage靶点设计及确认 | 第62-64页 |
| 3.2 Bmsage突变率 | 第64-65页 |
| 3.3 Bmsage突变体表型的分析和筛选 | 第65-70页 |
| 3.3.1 Bmsage G_0代蛾子的交配 | 第65-66页 |
| 3.3.2 Bmsage G_1代突变体筛选 | 第66页 |
| 3.3.3 Bmsage G_2代纯合突变体筛选 | 第66-67页 |
| 3.3.4 Bmsage突变体表型分析 | 第67-69页 |
| 3.3.5 Bmsage突变体胚胎期丝腺形态 | 第69-70页 |
| 3.3.6 不同基因型的Bmsage突变体筛选 | 第70页 |
| 3.4 Bmsage突变体化蛹期的生长情况 | 第70-72页 |
| 3.5 Bmsage突变体蛾子生长情况 | 第72页 |
| 3.6 Bmsage敲除的脱靶效应 | 第72-74页 |
| 4. 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 家蚕Bmsage丝腺缺失突变体的RNA-seq分析 | 第76-90页 |
| 1. 引言 | 第76页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第76-79页 |
| 2.1 实验材料 | 第76-77页 |
| 2.1.1 家蚕 | 第76-77页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第77页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第77页 |
| 2.2 实验方法 | 第77-79页 |
| 2.2.1 样品制备和上机测序 | 第77-78页 |
| 2.2.2 测序数据生物信息学分析 | 第78页 |
| 2.2.3 qRT-PCR验证基因表达水平 | 第78-79页 |
| 3. 实验结果 | 第79-87页 |
| 3.1 RNA-seq数据预处理 | 第79-80页 |
| 3.2 qRT-PCR验证结果 | 第80-81页 |
| 3.3 差异基因分析与筛选 | 第81-83页 |
| 3.4 差异基因的GO、KEGG信号通路分析 | 第83-87页 |
| 3.4.1 差异基因的GO分析 | 第83-84页 |
| 3.4.2 差异基因的KEGG信号通路分析 | 第84-86页 |
| 3.4.3 差异基因的WEGO分析 | 第86-87页 |
| 4. 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 结论及后续研究展望 | 第90-93页 |
| 1. 主要结论 | 第90-91页 |
| 2. 创新点 | 第91页 |
| 3. 后续研究展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 1. 攻读博士学位期间发表论文 | 第109-110页 |
| 2. 参与课题 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
