| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 蛋白酶概述 | 第12-13页 |
| 1.1 蛋白酶的分类 | 第12页 |
| 1.2 蛋白酶的专一性 | 第12-13页 |
| 1.3 蛋白酶的纯化 | 第13页 |
| 2 丝氨酸蛋白酶特征 | 第13-15页 |
| 2.1 丝氨酸蛋白酶及其类似物 | 第13页 |
| 2.2 丝氨酸蛋白酶的结构 | 第13-14页 |
| 2.3 丝氨酸蛋白酶的催化机制 | 第14页 |
| 2.4 丝氨酸蛋白酶的功能 | 第14-15页 |
| 3 丝氨酸蛋白酶与Bt毒素的互作 | 第15-18页 |
| 3.1 昆虫体内的丝氨酸蛋白酶 | 第15-16页 |
| 3.2 丝氨酸蛋白酶与原毒素的活化 | 第16-17页 |
| 3.3 昆虫丝氨酸蛋白酶介导的Bt毒素抗性 | 第17-18页 |
| 4 异源蛋白表达系统概述 | 第18-20页 |
| 4.1 原核表达系统特点 | 第18-20页 |
| 4.2 真核表达系统特点 | 第20页 |
| 5 昆虫丝氨酸蛋白酶基因的功能表达现状 | 第20-21页 |
| 6 本论文研究目的和意义 | 第21-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-38页 |
| 1 供试棉铃虫 | 第24页 |
| 2 试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1 主要化学试剂 | 第24页 |
| 2.2 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 3 主要方法 | 第25-38页 |
| 3.1 蛋白酶基因 HaSP3、HaSP6、HaSP24及其氨基酸序列结构分析 | 第25页 |
| 3.2 HaSP3、HaSP6、HaSP24 基因在不同发育阶段及组织部位的表达分析 | 第25-27页 |
| 3.3 pET32-HaSP3-BL21(DE3)原核表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 3.4 其他表达载体的构建 | 第29页 |
| 3.5 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第29-33页 |
| 3.6 重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第33-36页 |
| 3.7 HaSP3、HaSP6、HaSP24蛋白酶表达产物的酶活性测定 | 第36页 |
| 3.8 蛋白酶HaSP3表达产物对原毒素CrylAc的酶解作用 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-58页 |
| 1 HaSP3、HaSP6、HaSP24 蛋白酶氨基酸序列结构分析 | 第38-41页 |
| 2 HaSP3、HaSP6、HaSP24 基因在不同发育阶段及组织部位表达 | 第41-45页 |
| 2.1 HaSP3、HaSP6、HaSP24 基因在不同发育阶段的表达比较 | 第41-43页 |
| 2.2 HaSP3、HaSP6、HaSP24 基因在不同组织部位的表达比较 | 第43-45页 |
| 3 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第45-50页 |
| 3.1 不同宿主菌表达产物的比较 | 第45-46页 |
| 3.2 不同载体表达产物的比较 | 第46-48页 |
| 3.3 不同诱导温度表达产物分析 | 第48页 |
| 3.4 不同诱导时间表达产物分析 | 第48-50页 |
| 4 蛋白酶基因HaSP3、HaSP6、HaSP24的原核表达 | 第50-56页 |
| 4.1 rHaSP3、rHaSP6、rHaSP24 蛋白酶的表达纯化及鉴定 | 第50-53页 |
| 4.2 rHaSP3、rHaSP6、rHaSP24 蛋白表达产物的标签切除 | 第53-54页 |
| 4.3 HaSP3、HaSP6、HaSP24 蛋白酶表达产物活性测定 | 第54-56页 |
| 5 蛋白酶HaSP3表达产物对原毒素CrylAc的酶解作用 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-64页 |
| 1 HaSP3、HaSP6、HaSP24 蛋白酶氨基酸序列结构分析 | 第58-59页 |
| 2 HaSP3、HaSP6、HaSP24 基因在不同发育阶段及组织部位表达分析 | 第59页 |
| 3 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第59-61页 |
| 3.1 不同宿主菌表达产物的比较 | 第59-60页 |
| 3.2 不同载体表达产物的比较 | 第60-61页 |
| 3.3 不同诱导温度、诱导时间表达产物分析 | 第61页 |
| 4 rHaSP3、rHaSP6、rHaSP24蛋白的原核表达 | 第61-63页 |
| 5 蛋白酶HaSP3表达产物对CrylAc原毒素的酶解作用 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
