| 本研究工作的主要创新点 | 第6-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1.1 抗生素简介 | 第15-17页 |
| 1.2 聚酮化合物和聚酮的生物合成 | 第17-20页 |
| 1.3 非线性聚酮合酶 | 第20-24页 |
| 1.4 聚酮合酶的合成生物学 | 第24-30页 |
| 1.4.1 聚酮合酶中模块的减少 | 第24-25页 |
| 1.4.2 聚酮合酶中模块的增加 | 第25-27页 |
| 1.4.3 聚酮合酶中模块的替换 | 第27-28页 |
| 1.4.4 聚酮合酶模块中结构域的减少 | 第28-29页 |
| 1.4.5 聚酮合酶模块中结构域的增加 | 第29页 |
| 1.4.6 聚酮合酶模块中结构域的替换 | 第29-30页 |
| 1.5 阿扎霉素的研究概况 | 第30-32页 |
| 1.6 本研究的研究目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-41页 |
| 2.1.1 菌株 | 第34-35页 |
| 2.1.2 质粒 | 第35-36页 |
| 2.1.3 引物及其序列 | 第36-37页 |
| 2.1.4 培养基与溶液 | 第37-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-52页 |
| 2.2.1 微生物培养与菌种保藏 | 第41-42页 |
| 2.2.2 大肠杆菌化学转化感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.3 大肠杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.4 质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的化学转化 | 第43页 |
| 2.2.5 质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的电转化 | 第43页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒DNA的快速提取 | 第43页 |
| 2.2.7 大肠杆菌质粒DNA的碱裂解提取 | 第43-44页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒DNA的试剂盒提取 | 第44页 |
| 2.2.9 DNA片段的回收 | 第44-45页 |
| 2.2.10 PCR扩增体系与反应条件 | 第45页 |
| 2.2.11 PCR产物的纯化 | 第45页 |
| 2.2.12 链霉菌总DNA的快速提取 | 第45-46页 |
| 2.2.13 链霉菌总DNA的大量提取 | 第46页 |
| 2.2.14 链霉菌抗生素敏感性的测定 | 第46-47页 |
| 2.2.15 链霉菌-大肠杆菌双亲本属间接合转移 | 第47页 |
| 2.2.16 Southern Blot杂交(地高辛标记) | 第47-49页 |
| 2.2.17 Streptomyces sp. 211726的发酵罐发酵 | 第49页 |
| 2.2.18 阿扎霉素及其衍生物的提取和纯化 | 第49页 |
| 2.2.19 阿扎霉素及其衍生物的HPLC-ESI-HRMS检测 | 第49-50页 |
| 2.2.20 重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第50-51页 |
| 2.2.21 蛋白分子量的HPLC-ESI-HRMS检定 | 第51页 |
| 2.2.22 生物信息学分析 | 第51页 |
| 2.2.23 Streptomyces sp.211726中阿扎霉素生物合成基因簇Genbank序列登录号 | 第51-52页 |
| 第三章 阿扎霉素F产生菌Streptomyces sp.211726遗传操作系统的建立和优化 | 第52-66页 |
| 3.1 引言 | 第52-53页 |
| 3.2 结果与分析 | 第53-64页 |
| 3.2.1 阿扎霉素F产生菌Streptomyces sp. 211726在不同培养基中抗性敏感性测试 | 第53-56页 |
| 3.2.2 接合转移质粒的选择 | 第56-59页 |
| 3.2.3 在Mg~(2+)平板上基于孢子的双亲本接合转移体系构建 | 第59-61页 |
| 3.2.4 在Ca~(2+)平板上基于孢子的双亲本接合转移体系构建 | 第61-62页 |
| 3.2.5 接合转移子的验证 | 第62-64页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 阿扎霉素F生物合成基因簇的定位 | 第66-76页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 结果与分析 | 第66-74页 |
| 4.2.1 全基因组测序 | 第66-67页 |
| 4.2.2 生物信息学分析 | 第67-69页 |
| 4.2.3 基因文库的构建、筛选和测序 | 第69-71页 |
| 4.2.4 大片段敲除实验 | 第71-74页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 阿扎霉素F聚酮碳链骨架生物合成非线性对应模型的提出 | 第76-83页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 结果和分析 | 第76-82页 |
| 5.2.1 根据阿扎霉素F结构推导的聚酮合酶模块结构域的排列组合方式 | 第76-78页 |
| 5.2.2 根据聚酮合酶模块结构域的排列组合方式推导的阿扎霉素F结构 | 第78-79页 |
| 5.2.3 对于结构和编码基因矛盾的几种可能的原因 | 第79-82页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第82-83页 |
| 第六章 阿扎霉素F聚酮碳链骨架生物合成非线性对应模型的验证 | 第83-99页 |
| 6.1 引言 | 第83页 |
| 6.2 结果与分析 | 第83-97页 |
| 6.2.1 模块1中各结构域的生物信息学分析 | 第83-84页 |
| 6.2.2 DH_1结构域的失活突变株构建 | 第84-87页 |
| 6.2.3 △DH_1突变株的发酵及产物检测、纯化和结构鉴定 | 第87-92页 |
| 6.2.4 AzlA(△DH_1)蛋白表达载体的构建及蛋白的表达纯化 | 第92-93页 |
| 6.2.5 AzlA(△DH_1)蛋白体外催化体系的建立和产物的检测 | 第93-97页 |
| 6.3 小节与讨论 | 第97-99页 |
| 第七章 阿扎霉素F聚酮合酶中“开关式”烯醇还原酶结构域的揭示 | 第99-104页 |
| 7.1 引言 | 第99页 |
| 7.2 结果与分析 | 第99-102页 |
| 7.2.1 野生型AzlA蛋白表达载体的构建及蛋白的表达纯化 | 第99-100页 |
| 7.2.2 野生型AzlA蛋白体外催化实验和产物的检测 | 第100-102页 |
| 7.3 小结与讨论 | 第102-104页 |
| 第八章 总结与展望 | 第104-106页 |
| 8.1 本研究工作的总结 | 第104-105页 |
| 8.2 本研究工作的展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
