| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 糖代谢研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 果实中糖分组成 | 第11页 |
| 1.1.2 果实中糖代谢 | 第11-12页 |
| 1.1.3 葡萄糖的生理功能 | 第12-13页 |
| 1.2 己糖激酶研究进展 | 第13-21页 |
| 1.2.1 己糖激酶简介 | 第13-17页 |
| 1.2.2 己糖激酶生理功能 | 第17-20页 |
| 1.2.3 己糖激酶调控植物激素信号转导 | 第20-21页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第23页 |
| 2.1.3 菌株及载体 | 第23页 |
| 2.1.4 酶类、化学药品与试剂、试剂盒以及培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 植物组织中总RNA的提取及检测 | 第24-27页 |
| 2.2.1.1 植物组织总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 CTAB法提取植物总RNA | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 植物组织总RNA含量以及纯度检测 | 第26页 |
| 2.2.1.4 植物RNA的纯化（去除RNA中DNA） 方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1.5 反转录cDNA第一链的合成 | 第27页 |
| 2.2.1.6 转录产物质量检测 | 第27页 |
| 2.2.2 植物基因组DNA的提取与纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第28页 |
| 2.2.4 目的片段回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第29页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态制备和转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌感受态制备方法 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 采用热击方法转化大肠杆菌DH5α 感受态细胞和测序 | 第30页 |
| 2.2.7 农杆菌LBA4404感受态细胞制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.7.1 农杆菌LBA4404感受态细胞制备 | 第30-31页 |
| 2.2.7.2 采用电击法转化农杆菌LBA4404感受态细胞 | 第31页 |
| 2.2.8 质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.9 质粒DNA的酶切 | 第32页 |
| 2.2.10 基因扩增和载体构建 | 第32页 |
| 2.2.10.1 MdHXK1基因扩增 | 第32页 |
| 2.2.10.2 MdHXK1基因正义表达载体的构建 | 第32页 |
| 2.2.10.3 MdHXK1基因原核表达载体的构建 | 第32页 |
| 2.2.11 MdHXK1生物信息学分析进化树构建 | 第32-33页 |
| 2.2.12 MdHXK1基因上游调控序列重要顺式作用元件分析 | 第33页 |
| 2.2.13 Southern blotting | 第33页 |
| 2.2.14 MdHXK1酶提取及葡萄糖磷酸化相对酶活性检测 | 第33-35页 |
| 2.3 转基因材料的获得和鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.1 拟南芥转化---浸花法 | 第35页 |
| 2.3.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4 蛋白技术 | 第36-38页 |
| 2.4.1 原核表达蛋白 | 第36页 |
| 2.4.2 蛋白破碎检测 | 第36页 |
| 2.4.3 考马斯亮蓝染色 | 第36页 |
| 2.4.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-49页 |
| 3.1 苹果己糖激酶基因MdHXK1的分子克隆与分析 | 第38-43页 |
| 3.1.1 MdHXK1基因的分子克隆 | 第38页 |
| 3.1.2 基因组结构分析 | 第38页 |
| 3.1.3 启动子顺式作用元件分析 | 第38-40页 |
| 3.1.4 Southern blotting鉴定拷贝数 | 第40页 |
| 3.1.5 MdHXK1蛋白的氨基酸序列分析 | 第40-41页 |
| 3.1.6 苹果MdHXK1的进化树及结构域分析 | 第41-42页 |
| 3.1.7 苹果MdHXK1亚细胞定位预测 | 第42-43页 |
| 3.2 MdHXK1的时空表达分析、葡萄糖磷酸化相对酶活性和葡萄糖含量检测 | 第43-46页 |
| 3.2.1 MdHXK1的时空表达分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 苹果不同发育时期果实中葡萄糖磷酸化相对酶活性和葡萄糖含量检测 | 第44-45页 |
| 3.2.3 MdHXK1对非生物胁迫的响应 | 第45-46页 |
| 3.3 苹果己糖激酶MdHXK1的原核诱导 | 第46-47页 |
| 3.3.1 MdHXK1原核诱导载体的构建 | 第46页 |
| 3.3.2 MdHXK1的原核表达结果 | 第46-47页 |
| 3.4 6%葡萄糖处理下过量表达苹果己糖激酶MdHXK1能够抑制拟南芥种子萌发后幼苗生长发育 | 第47-49页 |
| 3.4.1 转基因拟南芥的获得与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 6% 葡萄糖条件下转MdHXK1拟南芥种子萌发后幼苗生长情况 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-64页 |
| 7 附录 | 第64-66页 |
| 8 致谢 | 第66-67页 |
| 9 攻读学位期间发表的论文 | 第67页 |
