| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.2.1 酸性蛋白酶的概述 | 第12-17页 |
| 1.2.2 黑曲霉表达系统的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第20页 |
| 2.1.2 酶和主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 黑曲霉基因组的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 基因的克隆 | 第22-24页 |
| 2.2.3 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 黑曲霉同源重组菌株的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.5 纯合同源重组菌株的筛选与鉴定 | 第25页 |
| 2.2.6 重组菌株中酸性蛋白酶酶活的测定 | 第25-27页 |
| 2.2.7 重组菌株中酸性蛋白酶酶学性质分析 | 第27页 |
| 2.2.8 重组菌株中酸性蛋白酶稳定性分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-41页 |
| 3.1 酸性蛋白酶生产菌株的鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2 商品酸性蛋白酶的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 白曲霉酸性蛋白酶黑曲霉表达载体的构建 | 第30-33页 |
| 3.3.1 白曲霉pepB基因的扩增 | 第30页 |
| 3.3.2 酸性蛋白酶pep B基因连接T载体鉴定结果 | 第30-32页 |
| 3.3.3 酸性蛋白酶pep B基因黑曲酶表达载体pSZHG-pepB的构建 | 第32-33页 |
| 3.4 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第33-36页 |
| 3.4.1 冻融法转化农杆菌 | 第33-34页 |
| 3.4.2 农杆菌介导法转化黑曲霉及转化子的筛选 | 第34页 |
| 3.4.3 黑曲霉同源重组菌株的鉴定 | 第34-36页 |
| 3.5 PSZHG-PEPB重组菌株的表达检测 | 第36-38页 |
| 3.5.1 pSZHG-pep B重组菌株酸性蛋白酶的SDS-PAGE检测 | 第36-37页 |
| 3.5.2 pSZHG-pep B重组菌株酸性蛋白酶的活性检测 | 第37-38页 |
| 3.6 PSZHG-PEPB重组菌株中酸性蛋白酶酶学性质分析 | 第38-39页 |
| 3.6.1 温度对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3.6.2 pH对酶活力的影响 | 第38-39页 |
| 3.7 PSZHG-PEPB重组菌株中酸性蛋白酶稳定性分析 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 4.1 酸性蛋白酶稳定性分析 | 第41页 |
| 4.2 白曲霉酸性蛋白酶基因序列的分析 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第48页 |
