| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 细菌第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)的研究概况 | 第10-17页 |
| 1.1.1 生物体内的第二信使c-di-GMP | 第10页 |
| 1.1.2 c-di-GMP的合成与降解 | 第10-15页 |
| 1.1.3 c-di-GMP结合蛋白Dgc3的结构域 | 第15-16页 |
| 1.1.4 鉴定出的差异表达蛋白概括 | 第16-17页 |
| 1.2 立题依据和研究意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第18页 |
| 2.1.3 供试引物 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18-20页 |
| 2.1.5 试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.6 感受态的制备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 生物信息学分析蜡样芽孢杆菌0-9和dgc3突变体差异表达蛋白 | 第21页 |
| 2.2.2 构建敲除载体 | 第21-23页 |
| 2.2.3 遗传转化 | 第23页 |
| 2.2.4 基因缺失菌株的筛选及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 基因缺陷菌株的表型测定及其比较 | 第24-27页 |
| 2.2.6 dnaK基因缺失菌株的回补菌株的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.7 dnaK基因回补菌株的生物学特征测定 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-48页 |
| 3.1 蜡样芽孢杆菌0-9和dgc3突变体差异蛋白表达分析结果 | 第30页 |
| 3.2 构建敲除载体 | 第30-32页 |
| 3.2.1 目的基因上下游片段的扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.2 敲除载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.3 遗传转化 | 第32-34页 |
| 3.3.1 热激转化E.coli pir116 | 第32页 |
| 3.3.2 电击转化E.coli GM2163 | 第32-34页 |
| 3.3.3 电击转化到0-9感受态中 | 第34页 |
| 3.4 基因缺失菌株的获得 | 第34-36页 |
| 3.4.1 运用同源重组技术选择出基因缺陷菌株 | 第34页 |
| 3.4.2 验证基因缺失突变株 | 第34-36页 |
| 3.5 野生型0-9与基因缺陷型菌株的表型测定及比较 | 第36-48页 |
| 3.5.1 生长情况的测定及比较 | 第36页 |
| 3.5.2 菌株产生胞外多糖和菌落形态的测定 | 第36-37页 |
| 3.5.3 胞外酶产生能力的测定及比较 | 第37-39页 |
| 3.5.4 运动能力测定及比较 | 第39-40页 |
| 3.5.5 菌落形态的测定 | 第40-41页 |
| 3.5.6 dnaK基因表达量的测定 | 第41-42页 |
| 3.5.7 dnaK基因缺失菌株的回补菌株的获得 | 第42-44页 |
| 3.5.8 dnaK基因回补菌株的生物学特征测定 | 第44-48页 |
| 4 结论 | 第48-50页 |
| 5 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
