| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文名词及缩写 | 第9-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 一 实验材料 | 第15-23页 |
| 1.1 工具酶及分子量标准 | 第15页 |
| 1.2 主要生化试剂 | 第15页 |
| 1.3 培养基、血清及添加剂 | 第15页 |
| 1.4 试剂盒 | 第15-16页 |
| 1.5 菌株 | 第16页 |
| 1.6 质粒 | 第16-19页 |
| 1.7 细胞系 | 第19页 |
| 1.8 引物 | 第19-21页 |
| 1.9 生物信息学分析软件 | 第21页 |
| 1.10 主要仪器及设备 | 第21-23页 |
| 二 主要试剂及配制方法 | 第23-25页 |
| 2.1 细胞培养所需试剂 | 第23页 |
| 2.2 细菌培养所需试剂 | 第23页 |
| 2.3 琼脂糖凝胶电泳所需试剂 | 第23页 |
| 2.4 WESTERN BLOT所需试剂 | 第23-25页 |
| 三 实验方法 | 第25-37页 |
| 3.1 细胞学实验 | 第25-27页 |
| 3.1.1 细胞系的培养 | 第25页 |
| 3.1.2 细胞系的转染 | 第25-26页 |
| 3.1.3 细胞毒性实验 | 第26页 |
| 3.1.4 细胞增殖实验 | 第26页 |
| 3.1.5 细胞划痕实验 | 第26页 |
| 3.1.6 细胞侵袭实验 | 第26-27页 |
| 3.2 分子学实验 | 第27-37页 |
| 3.2.1 实时定量PCR | 第27-28页 |
| 3.2.2 质粒的构建 | 第28-33页 |
| 3.2.3 慢病毒的包装和感染 | 第33-34页 |
| 3.2.4 双荧光报告基因实验 | 第34页 |
| 3.2.5 Western blot | 第34-37页 |
| 四 实验结果 | 第37-51页 |
| 4.1 构建耐药株，利用表达谱分析筛选具有显著差异表MIR-320A | 第37-40页 |
| 4.1.1 耐药株的构建及耐药指数的检测 | 第37-38页 |
| 4.1.2 miRNA芯片表达分析及差异表达miRNAs的鉴定 | 第38-39页 |
| 4.1.3 mi R-320a与胰腺癌的相关性及其对胰腺癌患者化疗后生存率的影响 | 第39-40页 |
| 4.2 MIR-320A对胰腺癌细胞系 5-FU/GEMETICINE耐药性的影响 | 第40-44页 |
| 4.2.1 构建mi R-320a过表达克隆 | 第40页 |
| 4.2.2 mi R-320a在 293TN细胞中过表达成功 | 第40-41页 |
| 4.2.3 mi R-320a在胰腺癌细胞系中过表达成功 | 第41-42页 |
| 4.2.4 过表达mi R-320a促进胰腺癌细胞系的耐药性 | 第42-44页 |
| 4.3 MIR-320A对胰腺癌进展的影响 | 第44-47页 |
| 4.3.1 过表达mi R-320a促进胰腺癌细胞系的增殖能力 | 第44页 |
| 4.3.2 过表达mi R-320a促进胰腺癌细胞系的迁移能力 | 第44-45页 |
| 4.3.3 过表达mi R-320a促进胰腺癌细胞系的侵袭能力 | 第45-46页 |
| 4.3.4 过表达mi R-320a促进胰腺癌细胞系的EMT转化能力 | 第46-47页 |
| 4.4 MIR-320A促进胰腺癌细胞系 5-FU耐药性的分子机制 | 第47-51页 |
| 4.4.1 mi R-320a能够靶向结合到PDCD4的 3′UTR区 | 第47-48页 |
| 4.4.2 mi R-320a靶向抑制PDCD4的表达 | 第48-49页 |
| 4.4.3 PDCD4能够一定程度扭转miR-320a对胰腺癌 5-FU耐药性的影响 | 第49-51页 |
| 五 讨论 | 第51-55页 |
| 六 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 综述 | 第61-71页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 攻读硕士期间发表和待发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
