| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 甜味觉形成机制 | 第9-10页 |
| 1.3 甜味蛋白简介 | 第10-13页 |
| 1.4 Monellin蛋白的基因工程进展 | 第13-16页 |
| 1.4.1 甜味蛋白monellin在植物和微生物中的表达 | 第13-14页 |
| 1.4.2 影响monellin蛋白稳定性因素 | 第14-15页 |
| 1.4.3 影响monellin蛋白甜味活性因素 | 第15-16页 |
| 1.5 研究意义及内容 | 第16-18页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第16页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第16-18页 |
| 1.6 研究技术路线 | 第18-21页 |
| 1.6.1 甜味蛋白monellin的甜味阈值和热稳定性研究 | 第18-19页 |
| 1.6.2 甜味蛋白monellin的分子构建 | 第19-21页 |
| 第2章 野生型甜味蛋白monellin甜味阈值及熔点温度测定 | 第21-29页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料及试剂 | 第21页 |
| 2.3 仪器和设备 | 第21-22页 |
| 2.4 方法 | 第22-24页 |
| 2.4.1 甜味蛋白monellin基因在大肠杆菌中表达 | 第22页 |
| 2.4.2 甜味蛋白monellin在蒸馏水中透析 | 第22-23页 |
| 2.4.3 甜味蛋白monellin的浓度测定 | 第23页 |
| 2.4.4 甜味蛋白monellin的甜味阈值测定 | 第23页 |
| 2.4.5 甜味蛋白monellin的熔点温度测定 | 第23-24页 |
| 2.5 结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.5.1 甜味蛋白monellin透析结果 | 第24页 |
| 2.5.2 Monellin蛋白浓度测定结果 | 第24-25页 |
| 2.5.3 甜味蛋白monellin的甜味阈值测定结果 | 第25页 |
| 2.5.4 甜味蛋白monellin的熔点温度测定结果 | 第25-27页 |
| 2.6 本章小结 | 第27-29页 |
| 第3章 基于monellin蛋白表面电荷和分子内部作用力提升其甜度和热稳定性的分子设计 | 第29-39页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 材料 | 第29-30页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、酶 | 第29页 |
| 3.2.2 化学试剂及药品 | 第29页 |
| 3.2.3 培养基与试剂配制方法 | 第29-30页 |
| 3.3 仪器和设备 | 第30页 |
| 3.4 方法 | 第30-35页 |
| 3.4.1 甜味蛋白monellin突变位点的设计 | 第30-32页 |
| 3.4.2 甜味蛋白monellin的定点突变 | 第32-35页 |
| 3.5 结果与分析 | 第35-37页 |
| 3.5.1 甜味蛋白monellin突变位点的设计结果 | 第35-36页 |
| 3.5.2 甜味蛋白monellin的定点突变实验结果 | 第36-37页 |
| 3.6 本章小结 | 第37-39页 |
| 第4章 甜味蛋白monellin突变体基因异源表达纯化、性质鉴定及其结构与功能分析 | 第39-59页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 材料 | 第39-43页 |
| 4.2.1 试剂及药品 | 第39页 |
| 4.2.2 培养基与试剂配制方法 | 第39-42页 |
| 4.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 4.3 仪器和设备 | 第43页 |
| 4.4 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.4.1 突变质粒载体导入大肠杆菌中表达 | 第43-44页 |
| 4.4.2 甜味蛋白monellin的分离纯化 | 第44-45页 |
| 4.5 结果与分析 | 第45-57页 |
| 4.5.1 甜味蛋白monellin突变体聚丙烯酰氨凝胶电泳分析 | 第45-47页 |
| 4.5.2 维持甜味蛋白monellin结构稳定的突变体鉴定分析 | 第47-48页 |
| 4.5.3 影响甜味蛋白monellin甜味活性及热稳定性的突变体性质研究 | 第48-51页 |
| 4.5.4 基于优良单突变体组合构建的多重突变体蛋白性质研究 | 第51-54页 |
| 4.5.5 甜味蛋白monellin二级结构和功能关系分析 | 第54-55页 |
| 4.5.6 甜味蛋白monellin突变体分子模拟 | 第55-57页 |
| 4.6 本章小结 | 第57-59页 |
| 第5章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 结论 | 第59-60页 |
| 5.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第69页 |
