中文摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-7页 |
引言 | 第10-12页 |
材料与方法 | 第12-29页 |
1.1 主要试剂 | 第12-14页 |
1.2 实验耗材 | 第14页 |
1.3 实验仪器设备 | 第14-15页 |
1.4 细胞株 | 第15页 |
1.5 溶液配制 | 第15-21页 |
1.5.1 10%FBS DMEM培养基: | 第15-16页 |
1.5.2 1%FBS DMEM培养基 | 第16页 |
1.5.3 MTT配制(5mg/ml) | 第16页 |
1.5.4 10% SDS溶液: | 第16-17页 |
1.5.5 10% APS溶液 | 第17页 |
1.5.6 5X SDS-PAGE sample buffer | 第17页 |
1.5.7 1.5M Tris-HCL(PH8.8) | 第17页 |
1.5.8 0.5M Tris-HCL(PH6.8) | 第17-18页 |
1.5.9 10% 丙烯酰氨凝胶电泳分离胶 15ml (for 2gels) | 第18页 |
1.5.10 5% 丙烯酰氨凝胶电泳浓缩胶 6ml(for 2gels) | 第18页 |
1.5.11 10% 丙烯酰氨凝胶电泳分离胶 30ml(for 4gels) | 第18页 |
1.5.12 5% 丙烯酰氨凝胶电泳浓缩胶 12ml(for 4gels) | 第18-19页 |
1.5.13 12% 丙烯酰氨凝胶电泳分离胶 15ml (for 2gels) | 第19页 |
1.5.14 5X stripping buffer | 第19页 |
1.5.15 10XRnning Buffer | 第19页 |
1.5.16 1x Transfer Buffer | 第19-20页 |
1.5.17 10X磷酸盐缓冲液(PBS) | 第20页 |
1.5.18 PBST | 第20页 |
1.5.19 10%脱脂奶粉封闭液 | 第20页 |
1.5.20 10X 丽春红染液 | 第20-21页 |
1.6 实验方法 | 第21-28页 |
1.6.1 细胞复苏 | 第21页 |
1.6.2 细胞传代 | 第21页 |
1.6.3 细胞冻存 | 第21-22页 |
1.6.4 睫状神经生长因子(CNTF)以时间梯度处理细胞(以课题中的CNTF处理WT MEFs、DKO MEFs为例) | 第22-23页 |
1.6.5 Western blotting实验 | 第23-26页 |
1.6.6 MTT法检测细胞活性 | 第26-27页 |
1.6.7 以慢病毒为载体shRNA干扰Gαi1和Gαi3基因表达 | 第27-28页 |
1.7 统计学方法 | 第28-29页 |
实验结果 | 第29-42页 |
1.GΑI蛋白亚型GΑI1和GΑI3在CNTF激活AKT-MTORC1通路,上调GSK-3Β、GAB1及ERK信号蛋白磷酸化水平中具有重要作用 | 第29-34页 |
2.GAB1参与CNTF激活AKT-MTORC1、ERK信号通路及磷酸化抑制GSK-3Β 功能 | 第34-36页 |
3.CNTF对鱼藤酮处理的SK-N-SH有较弱的保护作用 | 第36-42页 |
3.1 CNTF对SK-N-SH细胞的保护作用 | 第36-37页 |
3.2 干扰Gαi1或Gαi3的表达对CNTF对SK-N-SH细胞保护作用的影响 | 第37-38页 |
3.3 干扰Gαi1和Gαi3表达对鱼藤酮细胞内MAPK及AMPK通路的改变 | 第38-42页 |
讨论 | 第42-45页 |
结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-52页 |
综述 | 第52-63页 |
参考文献 | 第56-63页 |
中英文缩略词表 | 第63-64页 |
攻读硕士学位期间公开发表的论文 | 第64-65页 |
致谢 | 第65-67页 |